1樓：寶98176鴉浦
比較難消化的細胞（潤洗方法5min還不能消化），就以colon cancer為例，比如hct15, ls411和km12，這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100 mm dish，一次最多加入500ul，就足夠了，一般我加300ul。即使這樣難消化的細胞，一般不超過5min，即可見細胞成片移動，就應該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候，比如tsdc細胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動。
常規的細胞實驗（增殖，凋亡，遷移，分化之掘凳猛類的），受消化影響不是很大，如果不用胰酶去孵育而判橋使用潤洗的方法消化的話（難消化細胞例外）。但少數實驗，比如病毒包裝，對細胞代數，對細胞狀態要求極高。這個時粗轎候，胰酶消化，就是潤洗，都會對細胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數一多，細胞包裝能力就會逐漸下降（當然也有其它因素影響包裝效率）。
這個時候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液（不是edta液）即可。這些鹽溶液通過影響ecm相關酶的活性，來使得細胞脫離基質附著表面，但不切割任何蛋白。<>
2樓：網友
先用pbs洗，把培養基洗乾淨。用的胰酶放在37度co2 培養箱消化幾分鐘。之後把板子拿出來輕輕拍下，細胞就消化下來了。
然後你在板子里加含有10%血清的培養基中和胰酶，之後吹打幾次拆孫細胞，這樣細胞就吹散成單細胞了。如果你想直接染色，你可以現在板子裡先放一片蓋玻片（先用酒精泡，然後火上過一下），然後把細胞鋪在板子裡，等細胞在蓋玻片上鋪好了（最好過24h後）你就可以染色了。染色完後可以把蓋玻片夾出來，倒扣在事先加好封片劑的載玻片上，這樣直接就可以在顯微鏡下看了。
直接在培養板裡染色，不好在顯微鏡下觀察吧，染色觀察的話鋪在載玻片上，在培養板裡先用緩衝塵御悔液（就是你培派正養細胞時候一直用的緩衝液哈）洗不要把細胞倒出去了，去掉培養基然後就可以用胰蛋白酶消化啦，在經過你輕輕的吹吹基本就是單個細胞啦就可以去染色觀察了，不過這只是細胞還沒有經過瞬轉只是對細胞染色目的是什麼呢。其實絕大部分細胞消化的時候是隻要用胰酶潤洗一遍即可，吸去胰酶後，殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細胞（絕大部分1min不到）。對於這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞，連續這樣傳代，對細胞傷害很大。
簡單的程式是pbs潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然後37度消化。
3樓：殷寒梅
一般你肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙壯移動，其實已經可以了，很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞，這是沒有必要的。一般能移動了，說明細胞與培養基質材料的附著已仔伍經消失了，細胞之間的附著也已經消失了，細胞已經獨立分佈了（雖然沒有呈現很廣的離散分佈）。這個時候應該停止消化，不要等到看到鏡下所有細胞都分鉛跡離得非常好，間隙很大，才停止。
細胞就是完全成單個細胞懸液，之後在貼壁的過程中仍然會聚集，這個是貼壁培養的細胞，尤其是腫瘤細胞的乙個特性，無論死活的細胞都是如此，你可以嘗試，準備100%的單個細胞懸液，貼壁後觀察細胞，仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。一些懸浮培養細胞也是如此，容易聚集，不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液（不要笑，這個是初養懸浮細胞的人常犯的錯誤，以為懸浮培養就是乙個乙個分開）。細胞只要能從基質上脫離下槐戚並來，這個時候即使是成片的（比如calu-3細胞），吹打不超過20次後（一般10次即可），成小規模聚集（10個細胞左右），是正常的，不要試圖再去延長消化時間，或者象有的同學那樣吹打1h，等待單細胞懸液出現。
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