如何進行雜交瘤細胞的抗體檢測及克隆化培養

2021-03-15 05:51:09 字數 770 閱讀 2559

1樓:北京索萊寶科技****

經選擇性培養基篩選後的雜交瘤細胞並非都是能分泌所需抗體的細胞。通常採用有限稀釋克隆細胞的方法,將雜交瘤細胞多倍稀釋,接種在多孔細胞培養板上培養,使每孔細胞不超過一個(理論上30%的孔中細胞數為0時,才能保證有些孔中是單個細胞),再由這些單細胞克隆生長,然後檢測各孔上清液中細胞分泌的抗體,那些上清液可與特定抗原結合的培養孔為陽性孔。

陽性孔中的細胞還不能保證是來自單個細胞,挑選陽性孔的細胞繼續進行有限稀釋,一般需進行3~4次,直至確信每個孔中增殖的細胞為單克隆細胞。該過程即為雜交瘤細胞的克隆化培養。

2樓:小周高等教育**答疑

融合後的細胞經過hat培養基選擇後,只有雜交瘤細胞可以存貨。但是,選出的雜交瘤細胞不一定就是能分泌研究者所需特定抗體的雜交瘤細胞。未將這些具有不同抗原特異性的雜交瘤細胞逐個分離,目前可用的方法有:

有限稀釋法、顯微操作法、半固態凝膠介質中培養並挑選克隆及熒光啟用細胞分選儀等,其中常用有限稀釋法來選擇。該方法是將雜交瘤細胞,用多孔細胞培養板培養,使每孔細胞不超過一個,通過培養讓其增殖。在對各孔上清液中細胞分泌的抗體進行檢測。

如果某孔內上清液中的抗體可與特定抗原結合,則定為陽性孔。但是,陽性孔中的細胞不能保證是單細胞,可能既有能產生特定抗體的雜交瘤細胞,又有其他雜交瘤細胞。對此,要挑選陽性孔中的細胞繼續進行有限稀釋。

一般要進行3次~4次,直到確定每個孔增殖的細胞為單克隆細胞。此過程為克隆化培養。一旦獲得所需要的雜交瘤細胞系,即用組織培養法和活體法對其進行擴增後,在196℃的液氮中長期凍存,隨時取用。

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