1樓：匿名使用者
引物可以通過一些軟體設計，比如primer 5 ，但是還需要注意一些細節問題。
比如1.引物最好在模板cdna的保守區內設計。 dna序列的保守區是通過物種間相似序列的比較確定的。
在ncbi上搜尋不同物種的同一基因，通過序列分析軟體（比如dnaman）比對（alignment），各基因相同的序列就是該基因的保守區。
2.引物長度一般在15~30鹼基之間。 引物長度（primer length）常用的是18-27 bp，但不應大於38，因為過長會導致其延伸溫度大於74℃，不適於taq dna 聚合酶進行反應。
3.引物gc含量在40%~60%之間，tm值最好接近72℃。 gc含量（***position）過高或過低都不利於引發反應。
上下游引物的gc含量不能相差太大。另外，上下游引物的tm值（melting temperature）是寡核苷酸的解鏈溫度，即在一定鹽濃度條件下，50%寡核苷酸雙鏈解鏈的溫度。有效啟動溫度，一般高於tm值5~10℃。
若按公式tm= 4（g+c）+2（a+t）估計引物的tm值，則有效引物的tm為55~80℃，其tm值最好接近72℃以使復性條件最佳。
2樓：匿名使用者
先找出你要擴增的「保守序列」的所有鹼基，到專門的設計軟體上搜尋最佳引物序列。
軟體和軟體的使用在丁香園上均可找到。
http://****dxy.**/bbs不過一開始最好有設計過的人在身邊指點，不然會有很多問題
3樓：匿名使用者
上面有很清楚
的設計方法。
4樓：許無憂
建議你去借分子克隆實驗指南來看看，或者採用引物設計軟體，比如primer premier 5，把序列輸入就可以得到不同打分的引物對
5樓：歸躍卜葉豐
microrna的莖環引物可以自己設計。據說有公司也可以幫忙合成，不過還是自己設計好了發過去比較省錢吧。內參一般是u6，因為它長度和microrna一樣比較短。
我做的反轉錄內參是跟microrna分開管子轉的real-time
quantification
ofmicrornas
bystem–loop
rt–pcr
這篇文獻上有比較容易看懂的莖環引物的圖。也可以看看幾篇相關的中文文獻都有。
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