1樓：匿名使用者
1. 引物應用核酸系列保守區內設計並具有特異性。
2.產物不能形成二級結構。
3. 引物長度一般在15~30鹼基之間。
4. g+c含量在40%~60%之間。
5. 鹼基要隨機分佈。
6. 引物自身不能有連續4個鹼基的互補。
7. 引物之間不能有連續4個鹼基的互補。
8. 引物5′端可以修飾。
9. 引物3′端不可修飾。
10. 引物3′端要避開密碼子的第3位。
2樓：嶽玉蓉酈昭
你是要問pcr引物設計的原則嗎？歡迎追問
設計引物應遵循以下原則：
①引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物鹼基：g+c含量以40-60%為宜，g+c太少擴增效果不佳，g+c過多易出現非特異條帶。atgc最好隨機分佈，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的鹼基，特別是最末及倒數第二個鹼基，應嚴格要求配對，以避免因末端鹼基不配對而導致pcr失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點，
被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點，
這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列資料庫的其它序列無明顯同源性。引物量：
每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
pcr引物設計哪些問題
3樓：艾康生物
引物的設計bai
一般要考慮以下幾個du
問題：1.長度,至少要16bp,通常為zhi18-30bp2.解鏈dao溫度（tm值）
3.避免回引物內部或引物之間存在互補答
序列（3個鹼基）,從而減少引物二聚體的形成以及引物內部二級結構的形成4.g+c含量儘量控制在40%-60%之間.4鍾鹼基的分佈應儘可能均勻.
儘量避免嘌呤或嘧啶的連續排列,以及t在3'末端的重複排列
5.引物的3'末端最好是g或c,但不要gc連排
如何設計熒光定量pcr的引物及taqman探針
用專門的試劑盒來做吧，然後按照說明書操作，挺方便的。我們實驗室以前用的biog熒光定量pcr試劑盒，反應挺靈敏的，實驗結果也不錯，而且染料法和探針法都有。可以用引物設計軟體，primer5就挺不錯的。你是要檢測dna還是rna？探針法檢測dna的話可以用biog super probe kit，檢測...
求助簡併引物的設計,各位大神,求助大神們怎麼設計簡併引物
博凌科為 為你解答 抄 我最近正襲在做基因的克隆,我一直比對cds,比對之後,找到保守區,再在primer 軟體中設計引物,找那些評分相對較好的引物,在看它是不是在你比對的保守區,如果實在是找不到合適的,就儘量滿足,就設計兼併引物了,找到與模版不同的鹼基,按照兼併原則設計即可 各位大神,求助大神們怎...
請問引物設計是用mRNA和其內部的CDS為都可以嗎
mrna和cds的序列是一致的,只不過是rna和dna的u和t的區別。pcr是合成dna,當然是用cds了。cds是編專碼序列,染色體的屬dna是體內轉錄後剪下才表達,構建質粒的dna在體外細胞內培養剪下不了。酶切位點的選擇是根據構建質粒所用的載體上的酶切位點,和cds上的酶切位點決定的。原則是 1...