大腸桿菌質粒提取濃度很低怎麼辦
1樓：網友
axugen的試劑盒已經很不錯了，要是提不出濃度很高的質粒，可以試試下面的一些方法：
1、增加收菌次數，相對提高了質粒的量，這樣的話裂解液的量可以適當增加；
2、裂解要襲迅充分，變性和復性按說明應該是不超過5分鐘，喊廳合理控制時間，一般在3分到4分半的時間都是可以的；
3、過柱子。
時，吸附的時間儘量長一些，可以在這期間做做其他實驗或者吃個飯什麼的；
4、如果沒有必要，不使用去蛋白液，因為每過一遍柱子，其損耗越大，不過這得鄭禪隱根據說明的菌種而定；
4、最後洗脫**的時候，要單方面提高濃度，就要適當減少洗脫液的量，我一般都是**到40~50 μl的，同時要增加洗脫次數，一般兩三次足矣。
如果以上方法都用遍了還無效，就應該考慮菌種本身的問題，是不是凍融或者傳代次數過高，導致質粒本身丟失？質粒本身在大腸桿菌的拷貝數。
是多少？不行的話建議重新將質粒匯入到大腸桿菌感受態細胞。中。
2樓：網友
可以根據蛋白大小選擇相應濃縮管濃縮。
下次提取時可以用一定量的洗脫液反覆洗脫2-3管膜。
大腸桿菌質粒的提取
3樓：倫藩
1、接1%含質粒的大腸桿菌細胞於2ml lb培養基。
振盪培養過夜。
3、取菌體於ep管，以4000rpm離心3min，棄上清液。
4、加溶液i(1％葡萄糖。
50mm/l edta ，25mm/l tris-hcl 充分混合。
5、加入溶液 ii( mm/l naoh，1％ sds)，輕輕翻轉混勻，置於冰浴5 min 。
6、加入預冷溶液iii(5 mol/l kac，，輕輕翻轉混勻，置於冰浴5 min 。
7、以10，000rpm離心20min，取上清液於另一新ep管。
8、加入等體積的異戊醇，混勻後於？0℃靜置10min。
9、再以10，000rpm離心20min，棄上清。
10、用70％乙醇。
0．5ml洗滌一次，抽乾所有液體。
11、待沉澱乾燥後，溶於0．05mlte緩衝液。中。
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