茚三酮法測氨基酸加熱顯色問題!急急急

2022-06-08 03:11:40 字數 4186 閱讀 9798

1樓:反翽葚讛笀仕藖

茚三酮水合物和與氨基酸的氨基反應,然後脫羧.轉變為一個亞胺,水解後,得到氨基茚二酮,再和一分子茚三酮水合物失水,即得到紫色的化合物(與脯氨酸、羥基脯氨酸生成黃色)

2樓:匿名使用者

老哥,找到問題所在了嗎?我也遇到一樣的問題了,求幫忙

茚三酮顯色問題

3樓:炭疽夫人

我覺得樓上的解答有個不妥之處:樓主說明了過程,無論是反應前試樣的處理還是反應後的測定,都是冷卻了的。所以,溫度這方面應該不會影響測定了。

而樓主擔心的氨基酸濃度過低這種假設可能也不會很大,因為茚三酮的顯色反應檢出下限很低,只要有幾微克的氨基酸都能檢測出來。

所以我分析可能有兩個原因:

1,ph值的影響。樓主在實驗中兩次用到緩衝液調節ph=5.5,但是在最後顯色的一步是在加熱的狀況下進行的。

沒有在反應過程中檢測ph值的變化,導致顏色不是ruhemann紫。而茚三酮與氨基酸作用得到的藍紫色物質是一種銨鹽。從結構上看,季銨和還原的酮的氧連在一起,這本來就是個亞穩定結構。

季銨鹽容易把h+給o得到一個羥基,所以很依賴ph的變化。那麼你的溶液不停變化吸光度就能解釋了,是由於ruhemann紫因ph不適不斷釋放nh3或nh4+的結果。這個情況一般是由於ph值過大引起的。

2,沒有反應完全。在進行樣品沉降時其實很有可能殘留了許多蛋白質和多肽。多肽和蛋白質也能形成這個反應,但是肽越大反應就越不靈敏。

所以有可能是第三產物,中間得到的醛可能會影響了這個反應,可能會生成其他帶有顏色的副產物干擾紫色的呈現。但是在逐漸反應後,醛由於大基團逐漸分解對反應的影響越來越小,這個干擾也就變小了,實際的紫色濃度自然比原來要弱許多。

以上只是個人推測,沒有依據。建議你用其它方法測定,比如用茚三酮作顯色劑的紙層析色譜,不僅可以計算總量,還可以初步估計氨基酸種數。

4樓:四月愛吃抹茶

我不知道我能不能幫到你。

分光光度計所測光度值並不會是一成不變的,我做分析化學實驗時發現,當溫度改變時,所測資料也會改變。光照待測液體久了,溫度上升,光度值反而減小。

茚三酮顯色後進行水浴,此時已經吸收了一定的光,也有了一定的溫度(液體有一定的熱量)。在一定溫度下,(氨基酸與茚三酮水合物在弱酸條件下共加熱時)氨基酸被氧化脫氨、脫羧,而茚三酮水合物被還原,其還原物可與氨基酸加熱分解產生的氨結合,再與另一分子茚三酮縮合成為藍紫色化合物,稱為羅曼紫------------你看到的可能是這個顏色。

取出後過一段時間待試液冷卻後,溫度慢慢回到開始,顏色也會慢慢變淺。

但是我有一點不明白,茚三酮顯色基本都要加熱來顯紫色,因為茚三酮跟酶類或者多肽在加熱狀況下發生顯紫色反應,應該在測光度時就應該呈現紫色,除非你沒有加熱,糾結,解答一下,我才大一啊,想不通~~~~~~~~~

5樓:匿名使用者

可惜我大學課本沒帶來

氨基酸顯色方法

6樓:畫筆下的海岸

1、使用茚三酮試劑,噴後110oc加熱顯出顏色。用茚三酮劑顯色後用硝酸酮試劑噴,斑點由蘭紫色轉成紅色。

2、使用茚三酮+硝酸酮試劑,噴後在電爐上烤至剛剛顯色,顏色在日光燈中逐漸加深,某些氨基酸首先顯出顏色,用筆立刻將色點記下,許多氨基酸賧出特殊的顏色,不同的氨基酸顯出的速度也有差別。

3、使用2—萘醌—4—磺酸試劑(folin試劑),噴後在室溫乾燥,不同的氨基產生各種顏色。

4.使用氯氣—聯甲苯胺試劑。也可以使氨基酸顯色。

擴充套件資料;

常用的顯色反應

雙縮脲反應:

該反應是肽鍵常用的反應,即在鹼性銅溶液中, 肽鍵與銅離子形成絡合物,呈紫色(在540nm有最大光吸收峰)。

酚試劑法:

該反應是比色法測定蛋白質的常用方法,即蛋白 質以鹼性銅溶液處理後,加用酚試劑,呈藍色(在650nm有最大光吸收峰)。

考馬斯亮藍法: 即蛋白質與一種蛋白質染料考馬斯亮藍g250反應形成複合物,該複合物在595nm有最大光吸收峰。ms蛋白質遇硝酸也顯色為黃色,不過這樣蛋白質就變性了。

茚三酮反應:除脯氨酸、羥脯氨酸和茚三酮反應生成黃色物質外,所有的α?氨基酸及一切蛋白質都能和茚三酮反應生成藍紫色物質。

還有阪口反應 。在次溴酸鈉或次氯酸鈉存在的條件下,許多含有胍基的化合物 (如胍乙酸、甲胍、胍基丁胺等)能與α-萘酚發生反應生成紅色物質。

7樓:

茚三酮反應(ninhydrin reaction):在加熱條件下,氨基酸或肽與茚三酮反應生成紫色(與脯氨酸反應生成黃色)化合物的反應。

肽鍵(peptide bond):一個氨基酸的羧基與另一個氨基酸的氨基縮合,除去一分子水形成的醯胺鍵。

肽(peptide):兩個或兩個以上氨基通過肽鍵共價連線形成的聚合物。是氨基酸通過肽鍵相連的化合物,蛋白質不完全水解的產物也是肽。

肽按其組成的氨基酸數目為2個、3個和4個等不同而分別稱為二肽、三肽和四肽等,一般含10個以下氨基酸組成的稱寡肽(oligopeptide),由10個以上氨基酸組成的稱多肽(polypeptide),它們都簡稱為肽。肽鏈中的氨基酸已不是遊離的氨基酸分子,因為其氨基和羧基在生成肽鍵中都被結合掉了,因此多肽和蛋白質分子中的氨基酸均稱為氨基酸殘基(amino acid residue)。

多肽有開鏈肽和環狀肽。在人體內主要是開鏈肽。開鏈肽具有一個遊離的氨基末端和一個遊離的羧基末端,分別保留有遊離的α-氨基和α-羧基,故又稱為多肽鏈的n端(氨基端)和c端(羧基端),書寫時一般將n端寫在分子的左邊,並用(h)表示,並以此開始對多肽分子中的氨基酸殘基依次編號,而將肽鏈的c端寫在分子的右邊,並用(oh)來表示。

目前已有約20萬種多肽和蛋白質分子中的肽段的氨基酸組成和排列順序被測定了出來,其中不少是與醫學關係密切的多肽,分別具有重要的生理功能或藥理作用。

多肽在體內具有廣泛的分佈與重要的生理功能。其中谷胱甘肽在紅細胞中含量豐富,具有保護細胞膜結構及使細胞內酶蛋白處於還原、活性狀態的功能。而在各種多肽中,谷胱甘肽的結構比較特殊,分子中穀氨酸是以其γ-羧基與半胱氨酸的α-氨基脫水縮合生成肽鍵的,且它在細胞中可進行可逆的氧化還原反應,因此有還原型與氧化型兩種谷胱甘肽。

近年來一些具有強大生物活性的多肽分子不斷地被發現與鑑定,它們大多具有重要的生理功能或藥理作用,又如一些「腦肽」與機體的學習記憶、睡眠、食慾和行為都有密切關係,這增加了人們對多肽重要性的認識,多肽也已成為生物化學中引人矚目的研究領域之一。

多肽和蛋白質的區別,一方面是多肽中氨基酸殘基數較蛋白質少,一般少於50個,而蛋白質大多由100個以上氨基酸殘基組成,但它們之間在數量上也沒有嚴格的分界線,除分子量外,現在還認為多肽一般沒有嚴密並相對穩定的空間結構,即其空間結構比較易變具有可塑性,而蛋白質分子則具有相對嚴密、比較穩定的空間結構,這也是蛋白質發揮生理功能的基礎,因此一般將胰島素劃歸為蛋白質。但有些書上也還不嚴格地稱胰島素為多肽,因其分子量較小。但多肽和蛋白質都是氨基酸的多聚縮合物,而多肽也是蛋白質不完全水解的產物。

蛋白質一級結構(primary structure):指蛋白質中共價連線的氨基酸殘基的排列順序。

氨基酸製備專利集

1、氨基酸奈米硒及其製備方法

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4、利用離交樹脂由d-n-氨甲醯氨基酸水解制備d-氨基酸的方法

5、一種d-氨基酸氧化酶的製備方法

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7、3-羥基-3-甲基丁酸(hmb)氨基酸鹽製備方法

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10、氨基酸葉面肥的製備方法

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16、穩定的氨基酸固體劑型和它們的製備方法

17、新的氨基酸衍生物,其製備方法及含該化合物的藥物組合物

18、由氨基酸與羧酸酐反應水法制備醯氨基羧酸的方法

19、氨基酸鋅的製備方法及其應用

20、氮-氨甲醯基氨基酸熱水解制備光學活性氨基酸的方法

目前認為,氨基酸以及各種氨基酸組成的二肽和三肽的吸收與單糖相似,是主動轉運,且都是同na+轉運耦聯的。當肽進入腸粘膜上皮細胞後,立即被存在於細胞內的肽酶水解為氨基酸。因此,吸收入靜脈血中的幾乎全部是氨基酸。

為什麼蛋白質與茚三酮反應有色

因為在加熱條件及弱酸環境下,蛋白質的主要成分氨基酸或肽與茚三酮反應生成紫藍色化合物及相應的醛和二氧化碳的反應。茚三酮在酸性的還原性環境下能與氨基酸 蛋白質中的 氨基迅速反應,產物羅曼紫 ruhemann s purple 在波長560 580 nm有吸收峰。該方法被廣 泛應用於食品 法醫 臨床診斷等...

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