常用dna限制性內切酶有哪些,常用DNA限制性內切酶有哪些?

2021-03-28 05:58:41 字數 3934 閱讀 3036

1樓:hi漫海

內切酶主要分成三大類。

第一類內切酶能識別專一的核苷酸順序,並在識別點附近的一些核苷酸上切割dna分子中的雙鏈,但是切割的核苷酸順序沒有專一性,是隨機的。這類限制性內切酶在dna重組技術或基因工程中沒有多大用處,無法用於分析dna結構或克隆基因。這類酶如ecob、ecok等。

第二類內切酶能識別專一的核苷酸順序,並在該順序內的固定位置上切割雙鏈。由於這類限制性內切酶的識別和切割的核苷酸都是專一的。所以總能得到同樣核苷酸順序的dn**段,並能構建來自不同基因組的dn**段,形成雜合dna分子。

因此,這種限制性內切酶是dna重組技術中最常用的工具酶之一。這種酶識別的專一核苷酸順序最常見的是4個或6個核苷酸,少數也有識別5個核苷酸以及7個、9個、10個和11個核苷酸的。如果識別位置在dna分子中分佈是隨機的,則識別4個核苷酸的限制性內切酶每隔46(4096)個核苷酸就有一個切點。

人的單倍體基因組據估計為3×199核苷酸,識別4個核苷酸的限制性內切酶的切點將有(3×109/2.5×102)約107個切點,也就是可被這種酶切成107片段,識別6個核苷酸的限制性內切酶也將有(3×109/4×103)約106個切點。

第二類內切酶的識別順序是一個迴文對稱順序,即有一箇中心對稱軸,從這個軸朝二個方向「讀」都完全相同。這種酶的切割可以有兩種方式。一是交錯切割,結果形成兩條單鏈末端,這種末端的核苷酸順序是互補的,可形成氫鍵,所以稱為粘性末端。

如ecori的識別順序為:

↓ |5』……gaa | ttc……3』

3』……ctt | aag……5』

| ↑垂直虛線表示中心對稱軸,從兩側「讀」核苷酸順序都是gaattc或cttaag,這就是迴文順序(palindrome)。實線剪頭表示在雙鏈上交錯切割的位置,切割後生成5』……g和aattc……3』、3』……cttaa和g……5』二個dn**段,各有一個單鏈末端,二條單鏈是互補的,可通過形成氫鍵而「粘合」。另一種是在同一位置上切割雙鏈,產生平頭末端。

例如haeⅲ的識別位置是:

↓5』……gg↓cc……3』

3』……cc↓gg……』

↑在箭頭所指處切割,產生的兩個dn**段是:

5』……gg cc……3』

和3』……cc gg……5』

有時候兩種限制性內切酶的識別核苷酸順序和切割位置都相同,差別只在於當識別順序中有甲基化的核苷酸時,一種限制性內切酶可以切割,另一種則不能。例如hpaⅱ和mspⅰ的識別順序都是5』……ccgg……3』,如果其中有5』-甲基胞嘧啶,則只有hpaⅱ能夠切割。這些有相同切點的酶稱為同切酶或異源同工酶(isoschizomer)。

第三類內切酶也有專一的識別順序,但不是對稱的迴文順序。它在識別順序旁邊幾個核苷酸對的固定位置上切割雙鏈。但這幾個核苷酸對則是任意的。

因此,這種限制性內切酶切割後產生的一定長度dn**段,具有各種單鏈末端。這對於克隆基因或克隆dn**段沒有多大用處。

2樓:匿名使用者

sfii,noti,sali,ecori,ecorv,psti 我在的實驗室經常用的

常見的限制性核酸內切酶有什麼?具體的名字

限制性內切酶有幾類?各有什麼特點

3樓:匿名使用者

限制性內切酶主要分成三大類。第一類限制性內切酶能識別專一的核苷酸順序,並在識別點附近的一些核苷酸上切割dna分子中的雙鏈,但是切割的核苷酸順序沒有專一性,是隨機的。這類限制性內切酶在dna重組技術或基因工程中沒有多大用處,無法用於分析dna結構或克隆基因。

這類酶如ecob、ecok等。

第二類限制性內切酶能識別專一的核苷酸順序,並在該順序內的固定位置上切割雙鏈。由於這類限制性內切酶的識別和切割的核苷酸都是專一的。所以總能得到同樣核苷酸順序的dn**段,並能構建來自不同基因組的dn**段,形成雜合dna分子。

因此,這種限制性內切酶是dna重組技術中最常用的工具酶之一。這種酶識別的專一核苷酸順序最常見的是4個或6個核苷酸,少數也有識別5個核苷酸以及7個、9個、10個和11個核苷酸的。第二類限制性內切酶的識別順序是一個迴文對稱順序,即有一箇中心對稱軸,從這個軸朝二個方向「讀」都完全相同。

這種酶的切割可以有兩種方式。一是交錯切割,結果形成兩條單鏈末端,這種末端的核苷酸順序是互補的,可形成氫鍵,所以稱為粘性末端。另一種是在同一位置上切割雙鏈,產生平頭末端。

第三類限制性內切酶也有專一的識別順序,但不是對稱的迴文順序。它在識別順序旁邊幾個核苷酸對的固定位置上切割雙鏈。但這幾個核苷酸對則是任意的。

因此,這種限制性內切酶切割後產生的一定長度dn**段,具有各種單鏈末端。這對於克隆基因或克隆dn**段沒有多大用處。

限制性內切酶有哪些特點?

4樓:中國農業出版社

在20世紀60年代,人們就注意到dna在感染宿主後會被降解的現象,從而提出限制性內切酶的概念。

2023年,首次從emphasis:role=italice.coli:

emphasisk中分離到限制性內切酶,它有特定的識別位點但沒有特定的切割位點,其中切割位點離識別位點達1000bp以上。2023年,美國約翰·霍布金斯大學的**ith偶然發現,流感嗜血桿菌(emphasis:role=italichaemophilus:

influenzaeemphasis)能迅速降解外源的噬菌體dna,其細胞提取液可降解emphasis:role=italice.coli:

emphasisdna,但不能降解自身dna,從而找到emphasis:role=italichinemphasisdⅱ限制性內切酶。

emphasis:role=italichinemphasisdⅱ限制性內切酶位點和切割位點如下::role=center5′-gttc↓agac-3′:

role=center3′-caag↑tctg-5′從此以後,發現的限制性內切酶越來越多,並且許多已經在實踐中得到應用。emphasis:role=italicecoemphasisri是應用最廣泛的限制性內切酶,切割位點如下::

role=center5′g↓aattc3′:role=center3′cttaa↑g5′限制性內切酶的命名遵循一定的原則,主要依據**而定,涉及宿主的種名、菌株號或生物型。

命名時,依次取宿主屬名第一字母,種名頭兩個字母,菌株號,然後再加上序號(羅馬數字)。如emphasis:role=italichinemphasisd:

ⅲ限制性內切酶,emphasis:role=italichinemphasis指**於流感嗜血桿菌,d表示來自菌株rd,ⅲ表示序號。以前在限制性內切酶和修飾酶前加r或m,且菌株號和序號小寫,但現在限制性內切酶名稱中的r省略不寫。

2023年下半年發現615種限制酶和98種甲基化酶;2023年發現10000種細菌或古細菌中存在3000種酶,且有200多種特異性。到2023年1月,共發現4342種限制酶和甲基化酶,其中限制酶有3681種,包括i型、ⅱ型、ⅲ型限制酶各有59、3612、10種。i類限制性核酸內切酶:

由3種不同亞基構成,兼具有修飾酶活性和依賴於atp的限制性內切酶活性,它能識別和結合於特定的dna序列位點,隨機切斷在識別位點以外的dna序列,這類酶的作用需要mgsuperscript2+superscript、s腺苷甲硫氨酸及atp等的參與。

ⅲ型限制與修飾系統的酶種類更少,所佔比例不到1%,如emphasis:role=italicecoemphasisp1和emphasis:role=italicecoemphasisp15,它們的識別位點分別是agacc和cagcag,切割位點則在下游2426bp處。

在基因操作中,一般所說的限制酶或修飾酶,除非特指,均指ⅱ型限制性核酸內切酶類。與i型限制性核酸內切酶相比,ⅱ型限制性核酸內切酶的特點是其切割位點靠近識別序列,切割產生具有黏性末端或平末端的dn**段。其基本特性為:

在dna分子雙鏈的特異性識別部位,切割dna分子產生鏈的斷裂;2個單鏈斷裂部位在dna分子上的分佈通常不是彼此相對的;斷裂形成的dn**段往往具有互補的單鏈延伸末端。

5樓:皇欣溥春柔

1、能識別雙鏈分子的某種特定核苷酸序列2、使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開

限制性內切酶能否剪下DNA單鏈,限制性內切酶能切割DNA單鏈嗎?

不能,只能識別雙鏈dna的特定序列。不能,限制性內切酶只能識別具有迴文結構的4 6個鹼基對的雙鏈dna 答 不能,限制性內切酶只切雙鏈dna.原因 識別雙鏈dna上的特定序列。不一定是迴文結構 進行切割。不能,限制酶只能識別特定的迴文序列 限制性內切酶能切割dna單鏈嗎?限制性內切酶只能識別並切割特...

DNA連線酶,RNA聚合酶,限制性內切酶,解旋酶有屬於RNA酶的麼?核酶有哪些

這些全是蛋白質。沒有rna。解旋酶是解dna雙鏈的,核酶只在細胞核內發揮作用嗎 人們發現copy 並且掌握了核酶的分子機制 rna的自我拼接 端粒的結構和功能 dna序列重組等機理.這種原生動物的基因組功能分別由兩個細胞核執行,即二倍體的小核與生殖過程有關,而多倍體的大核決定細胞的基因轉錄,併為轉化...

什麼是限制性內切酶?有何特點?它的發現有何特殊意義

特異性識別核酸的迴文序列,能對dna 進行特異性剪下的一種酶。在基因工程中作用很大,用於切割目的基因等,提供了新的研究手段,推動了生物學發展 限制性核酸內切酶是可以識別特定的核苷酸序列,並在每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵進行切割的一類酶,簡稱限制酶。根據限制酶的結構,輔因子的需求切位與...