1樓：匿名使用者
這個過程簡單講就是這麼幾步：
抽蛋白掛抗體到beads上，做成有親和力的柱子（其實所謂「柱子」就是帶有抗體的beads裝到ep管裡）
抽出來的蛋白去和柱子孵育，抗體識別的蛋白和與此蛋白互做的蛋白就掛到柱子上了
洗滌，將抗體不能結合的蛋白洗掉
洗脫，可以用蛋白電泳上樣緩衝液將beads上的抗體，蛋白，蛋白結合蛋白一起洗下來
電泳wb檢測
之所以叫免疫沉澱，是因為利用了抗體的親和力，所以叫免疫，而沉澱的意思就是指，抗體掛到beads上，液體裡面的物質用固相的beads可以分離出來，所以叫做沉澱。
而上面的7個步驟又會根據實際試驗的情況發生變化。所以你看到文獻上怎麼做的人都有。
如果感興趣，我建議你可以先讀一些general的protocol，例如：http://****
pierce***.***/files/tr0064-immunoprecipitation-guide.pdf ，再根據自己的實際狀況或者是實驗的結果再進行選擇。
2樓：匿名使用者
很複雜的 還要看考慮對照組 你是用磁珠 還是 agarose beads？
驗證兩蛋白的相互作用關係，要做哪些相關實驗
3樓：可愛的笑道
蛋白質與蛋白質之間相互作用
構成了細胞生化反應網路的一個主要組成部分，蛋白-蛋白互作網路與轉錄調控網路對調控細胞及其訊號有重要意義。
一、酵母雙雜交系統：酵母雙雜交系統是當前廣泛用於蛋白質相互作用組學研究的一種重要方法。其原理是當靶蛋白和誘餌蛋白特異結合後，誘餌蛋白結合於報道基因的啟動子，啟動報道基因在酵母細胞內的表達，如果檢測到報道基因的表達產物，則說明兩者之間有相互作用，反之則兩者之間沒有相互作用。
將這種技術微量化、陣列化後則可用於大規模蛋白質之間相互作用的研究。在實際工作中，人們根據需要發展了單雜交系統、三雜交系統和反向雜交系統等。angermayr等設計了一個sos蛋白介導的雙雜交系統。
可以研究膜蛋白的功能，豐富了酵母雙雜交系統的功能。此外，酵母雙雜交系統的作用也已擴充套件至對蛋白質的鑑定。
二、噬菌體展示技術：在編碼噬菌體外殼蛋白基因上連線一單克隆抗體的dna序列，當噬菌體生長時，表面就表達出相應的單抗，再將噬菌體過柱，柱上若含目的蛋白，就會與相應抗體特異性結合，這被稱為噬菌體展示技術。此技術也主要用於研究蛋白質之間的相互作用，不僅有高通量及簡便的特點，還具有直接得到基因、高選擇性的篩選複雜混合物、在篩選過程中通過適當改變條件可以直接評價相互結合的特異性等優點。
目前，用優化的噬菌體展示技術，已經展示了人和鼠的兩種特殊細胞系的cdna文庫，並分離出了人上皮生長因子訊號傳導途徑中的訊號分子。
三、等離子共振技術：表面等離子共振技術(su***ce pla**on resonance，spr)已成為蛋白質相互作用研究中的新手段。它的原理是利用一種奈米級的薄膜吸附上「誘餌蛋白」，當待測蛋白與誘餌蛋白結合後，薄膜的共振性質會發生改變，通過檢測便可知這兩種蛋白的結合情況。
spr技術的優點是不需標記物或染料，反應過程可實時監控。測定快速且安全，還可用於檢測蛋白一核酸及其它生物大分子之間的相互作用。
四、熒光能量轉移技術：熒光共振能量轉移(fret )廣泛用於研究分子間的距離及其相互作用; 與熒光顯微鏡結合，可定量獲取有關生物活體內蛋白質、脂類、dna 和rna 的時空資訊。隨著綠色熒光蛋白(gfp)的發展，fret 熒光顯微鏡有可能實時測量活體細胞內分子的動態性質。
提出了一種定量測量fret效率以及供體與受體間距離的簡單方法，僅需使用一組濾光片和測量一個比值，利用供體和受體的發射譜消除光譜間的串擾。該方法簡單快速，可實時定量測量fret 的效率和供體與受體間的距離，尤其適用於基於gfp 的供體受體對。
五、抗體與蛋白質陣列技術：蛋白晶片技術的出現給蛋白質組學研究帶來新的思路。蛋白質組學研究中一個主要的內容就是研究在不同生理狀態下蛋白水平的量變，微型化，整合化，高通量化的抗體晶片就是一個非常好的研究工具，他也是晶片中發展最快的晶片，而且在技術上已經日益成熟。
這些抗體晶片有的已經在向臨床應用上發展，比如腫瘤標誌物抗體晶片等，還有很多已經應用再眼就的各個領域裡。
六、免疫共沉澱技術：免疫共沉澱主要是用來研究蛋白質與蛋白質相互作用的一種技術，其基本原理是，在細胞裂解液中加入抗興趣蛋白的抗體，孵育後再加入與抗體特異結合的結合於pansobin珠上的金黃色葡萄球菌蛋白a(spa)，若細胞中有正與興趣蛋白結合的目的蛋白，就可以形成這樣一種複合物：「目的蛋白—興趣蛋白—抗興趣蛋白抗體—spapansobin」，因為spapansobin比較大，這樣複合物在離心時就被分離出來。
經變性聚丙烯醯胺凝膠電泳，複合物四組分又被分開。然後經western blotting法，用抗體檢測目的蛋白是什麼，是否為**蛋白。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內天然與興趣蛋白結合的，符合體內實際情況，得到的蛋白可信度高。
但這種方法有兩個缺陷：一是兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用;二是必須在實驗前**目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，所以，若**不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。
七、pull-down技術：蛋白質相互作用的型別有牢固型相互作用和暫時型相互作用兩種。牢固型相互作用以多亞基蛋白複合體常見，最好通過免疫共沉澱(co-ip) 、pull-down技術或far-western法研究。
pull-down技術用固相化的、已標記的餌蛋白或標籤蛋白(生物素-、polyhis-或gst-)，從細胞裂解液中釣出與之相互作用的蛋白。通過pull-down技術可以確定已知的蛋白與釣出蛋白或已純化的相關蛋白間的相互作用關係，從體外傳路或翻譯體系中檢測出蛋白相互作用關係。
免疫共沉澱的缺點
4樓：北京索萊寶科技****
（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用；
（2）兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用；
（3）必須在實驗前**目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，所以，若**不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。
（4）靈敏度沒有親和色譜高。
免疫共沉澱：
免疫共沉澱（co-immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用於研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。
免疫共沉澱的注意事項
(1) 確保共沉澱的蛋白是由所加入的抗體沉澱得到的，而並非外源非特異蛋白，單克隆抗體的使用有助於避免汙染的發生；
(2) 要確保抗體的特異性，即在不表達抗原的細胞溶解物中新增抗體後不會引起共沉澱；
(3) 確定蛋白間的相互作用是發生在細胞中，而不是由於細胞的溶解才發生的，這需要進行蛋白質的定位來確定。
5樓：▆▆▆丈
（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用；
（2）兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用；
（3）必須在實驗前**目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，所以，若**不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。
（4）靈敏度沒有親和色譜高。
請教做過免疫共沉澱的高手們談談該方法和用途
6樓：南大飛秒
飛秒檢測發現免疫共沉澱是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用於研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞記憶體在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。
當用預先固化在argarose beads上的蛋白質a的抗體免疫沉澱a蛋白，那麼與a蛋白在體內結合的蛋白質b也能一起沉澱下來。再通過蛋白變性分離，對b蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的，符合體內實際情況，得到的結果可信度高。
這種方法常用於測定兩種目標蛋白質是否在體內結合；也可用於確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。
免疫沉澱實驗的操作步驟比較多，同時由於在非變性條件下進行實驗，所以要得到一個完美的實驗結果，不僅需要高質量的抗體，同時對免疫沉澱體系也需要有嚴格的控制指標。免疫沉澱實驗從：蛋白樣品處理；抗體-agarose beads孵育；抗體-agarose beads複合物洗滌到最後的鑑定，每步都非常關鍵，需要嚴格控制實驗流程中每個關鍵步驟的質量，才能最終達到你的實驗目的。
其優點為：（1）相互作用的蛋白質都是經翻譯後修飾的，處於天然狀態；（2）蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的，可以避免人為的影響；（3）可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白複合物。缺點為：
（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用；（2）兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用； （3）必須在實驗前**目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，所以，若**不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。
什麼是免疫共沉澱？和免疫沉澱有啥區別
7樓：流式細胞術原理
免疫共沉澱基於抗原抗體特異性結合的原理，體外驗證兩種分子之間是否存在相互作用的技術。它是免疫沉澱的延伸。基本原理是在含有已知抗原的細胞裂解液中，將已知抗原作為靶蛋白，檢測裂解液中可能存在與之有相互作用的蛋白。
加入特定的抗體以及protein a-beads，會形成「抗原-抗體-protein a-beads」的複合物。在抗原抗體特異性結合沉澱靶蛋白的同時，存在相互作用的蛋白也能被沉澱下來，最終得到「蛋白-蛋白」的複合物。驗證是否有相互作用蛋白的存在。
免疫沉澱與免疫共沉澱實驗原理及方法大致相似，所不同的是在免疫共沉澱中對靶蛋白的結合由另一個與之發生相互作用的蛋白所替代。因此實驗屬於ip還是co-ip取決於實驗的目標是目的抗原還是相互作用蛋白質。
8樓：匿名使用者
什麼是免疫
共沉澱？和免疫沉澱有啥區別
免疫共沉澱的缺點：
（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用；
（2）兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用；
（3）必須在實驗前**目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，所以，若**不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。
（4）靈敏度沒有親和色譜高。
免疫共沉澱：
免疫共沉澱（co-immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用於研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。
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