1樓：天涯_海角
配製30%的甘油，儲存的時候等體積加入感受態細胞中，甘油終濃度為15%。
大腸桿菌感受態細胞製備為什麼要用cacl2處理細菌
2樓：阿魯巴星人
ca離子沉聚在細胞膜表面會使得細胞膜呈一種液晶的狀態，這種狀態便於在熱激條件下形成縫隙，便於轉化質粒。
在製備感受態細胞，儲存的時候用的甘油的濃度
3樓：匿名使用者
我們通常是配製80%的甘油，然後高壓滅菌備用。用的時候，取一半甘油一半菌液即可，-80儲存，復甦沒有問題。甘油的終濃度是40%。
4樓：天涯_海角
有那麼高嗎，我剛做的，甘油終濃度用的是15%。
5樓：匿名使用者
一般100ml 0.1mcacl2加入4ml甘油
6樓：輝楚達鳥
配製30%的甘油，儲存的時候等體積加入感受態細胞中，甘油終濃度為15%。
感受態細胞的製備時有什麼注意事項
7樓：天寂無痕
1、培養溫度。較低的溫度培養有利於感受態的形成，這樣可以獲得較高的感受態，但太低又不實用，因而產生了 inoue 的高效感受態製備方法，它實際是利用了所有有利於感受態的文獻而得出的一
個非常理想方法。
2、在儲存感受態時，dmso 要比甘油的效果要好，它會使感受態的效率增加。
3、液氮速凍也會使感受態的效率提高，因此推薦用液氮速凍感受態，然後儲存於超低溫冰箱內。
4、凍存的感受態用一次拿一管，不要反覆凍融。化凍之後立即使用，不要冰上放太久。
5、操作時可以輕彈輕甩，儘量避免用移液器吹吸。
8樓：y神級第六人
（1）質粒dna的質量和濃度：
用於轉化的質粒dna應主要是超螺旋態的，轉化率與外源dna的濃度在一定範圍內成正比，但當加入的外源dna的量過多或體積過大時，則會使轉化率下降。一般地，dna溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%，1ng的cccdna即可使50ul的感受態細胞達到飽和。對於以質粒為載體的重組分子而言，分子量大的轉化效率低，實驗證明，大於30kb的重組質粒將很難進行轉化。
此外，重組dna分子的構型與轉化效率也密切相關，環狀重組質粒的轉化率較分子量相同的線性重組質粒高10~100倍，因此重組dna大都構成環狀雙螺旋分子。
（2）感受態細胞的質量：
所用的cacl2等試劑均需是最高純度的，並用最純淨的水配製，最好分裝儲存於4℃
（3）細胞的生長狀態和密度
最好從-70℃或-20℃甘油儲存的菌種中直接轉接用於製備感受態細胞的菌液。不要用已經過多次轉接，及貯存在4℃的培養菌液。細胞生長密度以每毫升培養液中的細胞數在5×107個左右為佳。
即應用對數期或對數生長前期的細菌，可通過測定培養液的od600控制。對tg1菌株，od600為0．5時，細胞密度在5×107個/ml左右。（應注意od600值與細胞數之間的關係隨菌株的不同而不同）。
密度過高或不足均會使轉化率下降。
（二）感受態細胞轉化中的影響：
整個操作過程均應在無菌條件下進行，所用器皿，如離心管，移液槍頭等最好是新的，並經高壓滅菌處理。所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其它試劑、dna酶或雜dna所汙染，否則均會影響轉化效率或雜dna的轉入。整個操作均需在冰上進行，不能離開冰浴，否則細胞轉化率將會降低。
如何製備大腸桿菌感受態細胞
9樓：匿名使用者
（1）挑取大腸桿菌單菌落，接種於5 ml無抗生素的lb液體培養基中，37℃下振盪培養13h，至對數生長後期。將該菌懸液以1:50 的比例接種於100 ml lb 液體培養基中，37℃振盪培養2-3h至od600＝0.
5。（2）在無菌條件下將培養液轉入離心管中，冰上放置10 min，使培養物冷卻至0℃，然後4℃，4000rpm離心10min；
（3）棄去上清，倒置1 min，以便將培養液流盡；
（4）用冰預冷的0.1 mol/l的cacl2溶液10 ml輕輕懸浮細胞，充分混勻，冰上放置30 min後，4℃下4000rpm離心10min；
（5）棄去上清，並倒置1 min，以便最後的痕量培養液流盡；
（6）加入4 ml預冷含15%甘油的0.1 mol/l的cacl2溶液，輕輕懸浮細胞，冰上放置幾分鐘，即成感受態細胞懸液；
（7）感受態細胞100 μl分裝，貯存於-70 ℃儲存備用。
製作大腸桿菌感受態細胞時，最後儲存細胞時用甘油好呢？還是用dmso好呢
10樓：匿名使用者
甘油就可以了，dmso是用來保護細胞這種比較嬌嫩的，大腸桿菌就用便宜一點的好了。
希望能夠幫到你~有問題一起討論解決哦~
11樓：匿名使用者
感受態細胞一般都是用甘油就可以了，放在-80冰箱半年內都有效
12樓：匿名使用者
我建議用甘油，但是還要看你個人了
製備出來的感受態細胞在什麼時候做轉化最佳
13樓：阿魯巴星人
當場做出來的，當時做轉化，轉化效率最高。
儲存在-80冰箱的感受態，儲存40天以後，感受態效率會有明顯下降。
經轉化的感受態細胞，塗完板後，還有剩餘的菌液，為什麼是放在-4度儲存，為什麼不能放在-20度？？
14樓：匿名使用者
是4度吧。。放4度是抑制其生長。。若放在-20度，雖然經過轉化後復甦，細胞是有些恢復了活性，但是畢竟還是很脆弱，-20度冷凍細胞，然後再解凍使用的話，很容易使細胞死亡的，加之如果本來細胞的轉化效率就不是很高的話，可能再次塗板的結果是沒有菌落長出。。。
一般，我們做實驗，剩餘對的菌液是不會再用的，一是不靠譜，二是若是塗的板沒長單菌落的話，那麼這個剩餘的菌液也就沒什麼作用了：若是長出了，大可以抽提質粒，下次用時再轉，或者搖菌後用甘油保種，下次用時可選擇劃線，也可以直接搖菌。。。
個人感覺那個剩餘的菌液，不存也罷。。不知道你那邊存起來時為了？？？
15樓：匿名使用者
為什麼要儲存？都塗上不就完了，如果轉化率較高，不必用離心，吸取200微升塗上就行了，轉化率低的時候離一下心倒掉上清留一兩百微升塗板。一般4度短時間儲存，-20度長期儲存。
菌液反覆凍融會影響菌種活力。如果一兩天內就要用還是放4度好。
做好的感受態細胞在-80度能儲存多久呢？
16樓：春野櫻
一般的細胞-80儲存2-3個月，最後不要超過2個月。
17樓：不流淚的兵
hen nan hui da
手上沾了感受態細胞液，感受態細胞的製備時有什麼注意事項
沒關係的，清洗乾淨就可以了，感受態細胞就是處理過的用來擴增dna的普通細胞，在手上也不會有什麼傷害，不用擔心 感受態細胞的製備時有什麼注意事項 1 培養溫度。較低的溫度培養有利於感受態的形成，這樣可以獲得較高的感受態，但太低又不實用，因而產生了 inoue 的高效感受態製備方法，它實際是利用了所有有...
在大腸桿菌感受態細胞的製備及轉化實驗中
兩個目的 1熱激後的大腸桿菌細胞比較脆弱,培養可以恢復細胞的活性 2進一步培養,提高菌液中大腸桿菌的濃度。為什麼大腸桿菌感受態細胞製備和轉化 轉化實驗用bai液態的lb是為了讓細du胞恢復培 zhi養,也有人稱 之為讓其孵育,質dao粒或其他經專在液態lb中恢復屬培養後再塗布平板 固態培養基 是為了...
感受態轉化，什麼叫感受態細胞？什麼叫轉化
最近我bai們也在作感受態細胞轉du化 做轉化時zhi 一定要注意用冷的氯化鈣，dao還可以在加入回後42度熱休克90秒，這樣效答 果比較好。篩選時我們用的質粒中有氨卞黴素的抗性，所以只是在培養基中加入氨卞黴素就成了。但是藍白篩選不是白色的是轉入質粒的麼？籃斑是沒轉入的啊。www.biooo.com...