怎樣用實驗原理來證明dna是半保留複製

2021-03-07 04:51:50 字數 5400 閱讀 6756

1樓:春素小皙化妝品

在僅以15nh4c1為氮源的培養基裡,使大腸桿菌繁殖數代,將其dna用重同位素15n標記上,然後立即將大腸桿菌轉移到14nh4c1培養基中繼續培養,按不同時間取樣品抽提dna,採用氯化銫密度梯度離心法分析。

結果表明dna分子在0代顯示重密度(hh),1代全部為中等密度(hl),2代表現為中等密度(hl)與輕密度(ll)等量。這樣,華森-克里克(watson-crick)的半保守複製模型首先在大腸桿菌得到了分子水平的證明。

擴充套件資料

dna複製為一個邊解旋邊複製的過程。複製開始時,dna分子首先利用細胞提供的能量,在解旋酶的作用下,把兩條螺旋的雙鏈解開,這個過程叫做解旋。然後,以解開的每一段母鏈為模板,以周圍環境中游離的四種脫氧核苷酸為原料,按照鹼基互補配對原則,在有關酶的作用下,各自合成與母鏈互補的一段子鏈。

隨著解旋過程的進行,新合成的子鏈也不斷地延伸,同時,每條子鏈與其對應的母鏈盤繞成雙螺旋結構,從而各形成一個新的dna分子。這樣,複製結束後,一個dna分子就形成了兩個完全相同的dna分子。新複製出的兩個子代dna分子,通過細胞**分配到子細胞中去。

新合成的每個dna分子中,都保留了原來dna分子中的一條鏈。

2樓:匿名使用者

人的細胞先在含氮15的培養基和普通培養基上擴增,得到含氮15的dna和不含氮15的氮14dna的兩種細胞

下一步是將含氮15dna的細胞取適量轉移至普通培養基,

經過一代後,用氯化銫密度梯度離心等數量的三種細胞(只經過氮十四培養的、只經過氮十五培養的和兩種都經歷的),因為同位素的密度不同,一半氮十五一半氮十四的dna分子會在氮十五和氮十四的dna分子之間出現一個新的區帶,

兩代後的細胞離心和一代的比較會發現含有兩種氮的雜合的dna並不會增加,而氮十四的會加倍,

這說明dna在複製時會分成兩部分分別構成子代dna的一半,這些dna在多代後仍然保持其完整性

或者用放射性同位素標記法~!

用dna中含有的p ,s等進行標記`

然後分析`

3樓:倚樓丶丶聽風雨

dna半保留複製的實驗是如何做的

4樓:匿名使用者

密度梯度離心法,用氮十四和氮十五

怎樣證明dna分子是半保留複製的

5樓:淵源

在上世紀中葉(1950s)james watson 和 francis crick提出了著名的dna雙螺旋以及雙鏈間鹼基配對的模型,根據這個模型,他們進一步提出了dna複製的半保留模型(semiconservative model),雖然這個模型比當時並存的全保留模型(conservative 模型)看起來簡單易行的多,但始終缺乏有說服力的資料。 最後在2023年,當時在caltech作研究生的matthew meselson和作博士後的franklin stahl設計並實現了這組著名的,證明了dna複製半保留機理的實驗。

試驗中,他們先將大腸桿菌細胞培養在用15nh4cl作為唯一氮源的培養液裡養很長時間(14代),使得細胞內所有的氮原子都以15n的形式存在(包括dna分子裡的氮原子)。這時再加入大大過量的14nh4cl和各種14n的核苷酸分子,細菌從此開始攝入14n,因此所有既存的「老」dna分子部分都應該是15n標記的, 而新生的dna則應該是未標記的。接下來他們讓細胞們繼續高高興興地生長,而自己則在在不同時間提取出dna分子,利用cscl密度梯度離心分離,而當細胞**了一次的時候只有一個dna帶,這就否定了所謂的全保留機理,因為根據全保留機理,dna複製應該通過完全複製一個「老」dna雙鏈分子而生成一個全新的dna雙鏈分子,那麼當一次複製結束,應該一半dna分子是全新(雙鏈都完全只含14n), 另一半是「全老」(雙鏈都完全只含15n)。

這樣一來應該在出現在離心管的不同位置,顯示出兩條黑帶。

通過與全14n和全15n的dna標樣在離心管中沉積的位置對比,一次複製(**)時的這根dna帶的密度應當介於兩者之間,也就是相當於一根鏈是14n,另一根鏈是15n。而經歷過大約兩次複製後的dna樣品(generation=1.9)在離心管中顯示出強度相同的兩條黑帶,一條的密度和generation=1時候的一樣,另一條則等同於完全是14n的dna。

這樣的結果跟半保留機理推測的結果完美吻合

就這樣,關於dna複製機理的爭論終於被meselson和stahl完美解決,而基因學和基因組學也得以在此後的五十年取得一系列重大突破。

如何證明生物的dna複製方式是半保留複製

6樓:

有關雙鏈dna(1、2鏈)與mrna(3鏈)的鹼基計算:

①dna單、雙鏈配對鹼基關係:a1=

t2,t1=a2;a=t=a1+a2=t1+t2,c=g=c1+c2=g1+g2.a+c=g+t=a+g=c+t=1/2(a+g+c+t);(a+g)%=(c+t)%=(a+c)%=(g+t)%=50%;(雙鏈dna兩個特徵:嘌呤鹼基總數=嘧啶鹼基總數)

dna單、雙鏈鹼基含量計算:(a+t)%+(c+g)%=1;(c+g)%=1―(a+t)%=2c%=2g%=1―2a%=1―2t%;(a1+t1)%=1―(c1+g1)%;(a2+t2)%

=1―(c2+g2)%.

②dna單鏈之間鹼基數目關係:a1+t1+c1+g1=t2+a2+g2+c2=1/2(a+g+c+t);

a1+t1=a2+t2=a3+u3=1/2(a+t);c1+g1=c2+g2=c3+g3=1/2(g+c);

③a.dna單、雙鏈配對鹼基之和比((a+t)/(c+g)表示dna分子的特異性):

若(a1+t1)/(c1+g1)=m,則(a2+t2)/(c2+g2)=m,(a+t)/(c+g)=m

b.dna單、雙鏈非配對鹼基之和比:

若(a1+g1)/(c1+t1)=n,則(a2+g2)/(c2+t2)=1/n;(a+g)/(c+t)=1;若(a1+c1)/(g1+t1)=n,則(a2+c2)/(g2+t2)=1/n;(a+c)/(g+t)=1.

④兩條單鏈、雙鏈間鹼基含量的關係:

2a%=2t%=(a+t)%=(a1+t1)%=(a2+t2)%=(a3+u3)%dna複製時分三步:解旋,配對,復旋.

複製時遵循鹼基互補配對原則,a與t之間以雙鍵連線,c與g之間以三鍵連線.

dna複製是半保留複製,一個dna複製n代後產生的子代dna數目是2的n次方個.含有原來母鏈的dna有2個.

=t1%+t2%=a1%+a2%;

2c%=2g%=(g+c)%=(c1+g1)%=(c2+g2)%=(c3+g3)%

=c1%+c2%=g1%+g2%.

丶軟弱204 2014-10-19

追問:另求關於1個全部被氮15標記的dna複製n代後關於dna的各種分子數計算公式,謝謝

追答:①親代有1條dna,n次複製後,有2^n條dna,去除親代1條,複製後dna多出了2^n-1條   所以,需要消耗的遊離的脫氧核糖核苷酸為m×(2^n-1)個   ②由半保留複製原理可知:複製n代後,共有2的n次方個dna分子,這些分子中共有m乘2的n次方個該種脫氧核苷酸,其中包括最保留下來的m個。

因此,經過經過n代複製共消耗遊離的脫氧核苷酸個. 由於第n次複製為第n-1代到第n代,dna分子數由2的n-1次方個增加到2的n次方個,增加了2的n-1次方個,因此需該脫氧核苷酸為m×(2^n-1)個

7樓:me資源控

利用同位素標記的方法用含有氮15的nh4cl培養液來培養大腸桿菌,獲得含有氮15標記的大腸桿菌,然後將大腸桿菌轉到含氮14的普通培養液中,並在不同時刻提取大腸桿菌dna進行密度梯度離心,由於氮15比氮14重,會出現分層的現象,人為地將試管分為上中下三層,會發現第一次測量大部分被標記dna都在下層,第二次會集中出現在中層,第三次會出現在上和中,說明上層是不含氮15的,中層還含有氮15,但是不在下層,說明dna複製的方式是半保留複製的,自己理解一下,不會可以追問,望採納

證明dna是半保留複製的試驗

8樓:匿名使用者

用聚合酶鏈式反du應(zhipcr)

pcr是現今dna體外複製dao的有效方法,通過專控制迴圈數可控制dna複製的代數

具體流程為屬:1、94攝氏度變性(破碎細胞,dna解螺旋,並變性成單鏈,時間較長)

2、94攝氏度變性(時間短)

3、低溫退火(據引物等實際情況確定溫度)

4、中溫延伸(一般為72攝氏度,這就是細胞中的複製過程)5、繼續延伸(時間短),該步驟可有可無

6、保溫(12攝氏度),據具體情況可以刪掉該步驟以上是dna複製一代的程式,如果需要增加複製代數,則用pcr儀進行2-4步的迴圈即可

具體知識可查閱《分子克隆》《分子生物學》等書

9樓:free我是你浩哥

半保留複製:是dna複製的模式

10樓:匿名使用者

多代複製後,具有氮14/氮15的dna永遠只有一條帶

而具有氮14帶可以有多條,不影響得出結論

至於如何控制培養一代,噬菌體是有溶菌週期的,可以在他未釋放前劇烈**攪拌,把它的dna弄出來

哪個實驗證明dna的半保留複製

11樓:聽風

在上世紀中葉(1950s)james watson 和 francis crick提出了著名的dna雙螺旋以及雙鏈間鹼基配對的模型,根據這個模型,他們進一步提出了dna複製的半保留模型(semiconservative model),雖然這個模型比當時並存的全保留模型(conservative 模型)看起來簡單易行的多,但始終缺乏有說服力的資料. 最後在2023年,當時在caltech作研究生的matthew meselson和作博士後的franklin stahl設計並實現了這組著名的,證明了dna複製半保留機理的實驗.

試驗中,他們先將大腸桿菌細胞培養在用15nh4cl作為唯一氮源的培養液裡養很長時間(14代),使得細胞內所有的氮原子都以15n的形式存在(包括dna分子裡的氮原子).這時再加入大大過量的14nh4cl和各種14n的核苷酸分子,細菌從此開始攝入14n,因此所有既存的「老」dna分子部分都應該是15n標記的, 而新生的dna則應該是未標記的.接下來他們讓細胞們繼續高高興興地生長,而自己則在在不同時間提取出dna分子,利用cscl密度梯度離心分離,而當細胞**了一次的時候只有一個dna帶,這就否定了所謂的全保留機理,因為根據全保留機理,dna複製應該通過完全複製一個「老」dna雙鏈分子而生成一個全新的dna雙鏈分子,那麼當一次複製結束,應該一半dna分子是全新(雙鏈都完全只含14n), 另一半是「全老」(雙鏈都完全只含15n).

這樣一來應該在出現在離心管的不同位置,顯示出兩條黑帶.

通過與全14n和全15n的dna標樣在離心管中沉積的位置對比,一次複製(**)時的這根dna帶的密度應當介於兩者之間,也就是相當於一根鏈是14n,另一根鏈是15n.而經歷過大約兩次複製後的dna樣品(generation=1.9)在離心管中顯示出強度相同的兩條黑帶,一條的密度和generation=1時候的一樣,另一條則等同於完全是14n的dna.

這樣的結果跟半保留機理推測的結果完美吻合。

證明dna是半保留複製的試驗,哪個實驗證明DNA的半保留複製

用聚合酶鏈式反du應 zhipcr pcr是現今dna體外複製dao的有效方法,通過專控制迴圈數可控制dna複製的代數 具體流程為屬 1 94攝氏度變性 破碎細胞,dna解螺旋,並變性成單鏈,時間較長 2 94攝氏度變性 時間短 3 低溫退火 據引物等實際情況確定溫度 4 中溫延伸 一般為72攝氏度...

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