1樓:匿名使用者
用聚合酶鏈式反du應(zhipcr)
pcr是現今dna體外複製dao的有效方法,通過專控制迴圈數可控制dna複製的代數
具體流程為屬:1、94攝氏度變性(破碎細胞,dna解螺旋,並變性成單鏈,時間較長)
2、94攝氏度變性(時間短)
3、低溫退火(據引物等實際情況確定溫度)
4、中溫延伸(一般為72攝氏度,這就是細胞中的複製過程)5、繼續延伸(時間短),該步驟可有可無
6、保溫(12攝氏度),據具體情況可以刪掉該步驟以上是dna複製一代的程式,如果需要增加複製代數,則用pcr儀進行2-4步的迴圈即可
具體知識可查閱《分子克隆》《分子生物學》等書
2樓:free我是你浩哥
半保留複製:是dna複製的模式
3樓:匿名使用者
多代複製後,具有氮14/氮15的dna永遠只有一條帶
而具有氮14帶可以有多條,不影響得出結論
至於如何控制培養一代,噬菌體是有溶菌週期的,可以在他未釋放前劇烈**攪拌,把它的dna弄出來
哪個實驗證明dna的半保留複製
4樓:聽風
在上世紀中葉(1950s)james watson 和 francis crick提出了著名的dna雙螺旋以及雙鏈間鹼基配對的模型,根據這個模型,他們進一步提出了dna複製的半保留模型(semiconservative model),雖然這個模型比當時並存的全保留模型(conservative 模型)看起來簡單易行的多,但始終缺乏有說服力的資料. 最後在2023年,當時在caltech作研究生的matthew meselson和作博士後的franklin stahl設計並實現了這組著名的,證明了dna複製半保留機理的實驗.
試驗中,他們先將大腸桿菌細胞培養在用15nh4cl作為唯一氮源的培養液裡養很長時間(14代),使得細胞內所有的氮原子都以15n的形式存在(包括dna分子裡的氮原子).這時再加入大大過量的14nh4cl和各種14n的核苷酸分子,細菌從此開始攝入14n,因此所有既存的「老」dna分子部分都應該是15n標記的, 而新生的dna則應該是未標記的.接下來他們讓細胞們繼續高高興興地生長,而自己則在在不同時間提取出dna分子,利用cscl密度梯度離心分離,而當細胞**了一次的時候只有一個dna帶,這就否定了所謂的全保留機理,因為根據全保留機理,dna複製應該通過完全複製一個「老」dna雙鏈分子而生成一個全新的dna雙鏈分子,那麼當一次複製結束,應該一半dna分子是全新(雙鏈都完全只含14n), 另一半是「全老」(雙鏈都完全只含15n).
這樣一來應該在出現在離心管的不同位置,顯示出兩條黑帶.
通過與全14n和全15n的dna標樣在離心管中沉積的位置對比,一次複製(**)時的這根dna帶的密度應當介於兩者之間,也就是相當於一根鏈是14n,另一根鏈是15n.而經歷過大約兩次複製後的dna樣品(generation=1.9)在離心管中顯示出強度相同的兩條黑帶,一條的密度和generation=1時候的一樣,另一條則等同於完全是14n的dna.
這樣的結果跟半保留機理推測的結果完美吻合。
5樓:猶雪晴集果
人的細胞先在含氮15的培養基和普通培養基上擴增,得到含氮15的dna和不含氮15的氮14dna的兩種細胞
下一步是將含氮15dna的細胞取適量轉移至普通培養基,
經過一代後,用氯化銫密度梯度離心等數量的三種細胞(只經過氮十四培養的、只經過氮十五培養的和兩種都經歷的),因為同位素的密度不同,一半氮十五一半氮十四的dna分子會在氮十五和氮十四的dna分子之間出現一個新的區帶,
兩代後的細胞離心和一代的比較會發現含有兩種氮的雜合的dna並不會增加,而氮十四的會加倍,
這說明dna在複製時會分成兩部分分別構成子代dna的一半,這些dna在多代後仍然保持其完整性
或者用放射性同位素標記法~!
用dna中含有的p
,s等進行標記`
然後分析`
6樓:溥蕾嘉知
n14和n15所做的同位素示蹤技術。
如何證明生物的dna複製方式是半保留複製
7樓:
有關雙鏈dna(1、2鏈)與mrna(3鏈)的鹼基計算:
1dna單、雙鏈配對鹼基關係:a1=
t2,t1=a2;a=t=a1+a2=t1+t2,c=g=c1+c2=g1+g2.a+c=g+t=a+g=c+t=1/2(a+g+c+t);(a+g)%=(c+t)%=(a+c)%=(g+t)%=50%;(雙鏈dna兩個特徵:嘌呤鹼基總數=嘧啶鹼基總數)
dna單、雙鏈鹼基含量計算:(a+t)%+(c+g)%=1;(c+g)%=1―(a+t)%=2c%=2g%=1―2a%=1―2t%;(a1+t1)%=1―(c1+g1)%;(a2+t2)%
=1―(c2+g2)%.
2dna單鏈之間鹼基數目關係:a1+t1+c1+g1=t2+a2+g2+c2=1/2(a+g+c+t);
a1+t1=a2+t2=a3+u3=1/2(a+t);c1+g1=c2+g2=c3+g3=1/2(g+c);
3a.dna單、雙鏈配對鹼基之和比((a+t)/(c+g)表示dna分子的特異性):
若(a1+t1)/(c1+g1)=m,則(a2+t2)/(c2+g2)=m,(a+t)/(c+g)=m
b.dna單、雙鏈非配對鹼基之和比:
若(a1+g1)/(c1+t1)=n,則(a2+g2)/(c2+t2)=1/n;(a+g)/(c+t)=1;若(a1+c1)/(g1+t1)=n,則(a2+c2)/(g2+t2)=1/n;(a+c)/(g+t)=1.
4兩條單鏈、雙鏈間鹼基含量的關係:
2a%=2t%=(a+t)%=(a1+t1)%=(a2+t2)%=(a3+u3)%dna複製時分三步:解旋,配對,復旋.
複製時遵循鹼基互補配對原則,a與t之間以雙鍵連線,c與g之間以三鍵連線.
dna複製是半保留複製,一個dna複製n代後產生的子代dna數目是2的n次方個.含有原來母鏈的dna有2個.
=t1%+t2%=a1%+a2%;
2c%=2g%=(g+c)%=(c1+g1)%=(c2+g2)%=(c3+g3)%
=c1%+c2%=g1%+g2%.
丶軟弱204 2014-10-19
追問:另求關於1個全部被氮15標記的dna複製n代後關於dna的各種分子數計算公式,謝謝
追答:1親代有1條dna,n次複製後,有2^n條dna,去除親代1條,複製後dna多出了2^n-1條 所以,需要消耗的遊離的脫氧核糖核苷酸為m×(2^n-1)個 2由半保留複製原理可知:複製n代後,共有2的n次方個dna分子,這些分子中共有m乘2的n次方個該種脫氧核苷酸,其中包括最保留下來的m個。
因此,經過經過n代複製共消耗遊離的脫氧核苷酸個. 由於第n次複製為第n-1代到第n代,dna分子數由2的n-1次方個增加到2的n次方個,增加了2的n-1次方個,因此需該脫氧核苷酸為m×(2^n-1)個
8樓:me資源控
利用同位素標記的方法用含有氮15的nh4cl培養液來培養大腸桿菌,獲得含有氮15標記的大腸桿菌,然後將大腸桿菌轉到含氮14的普通培養液中,並在不同時刻提取大腸桿菌dna進行密度梯度離心,由於氮15比氮14重,會出現分層的現象,人為地將試管分為上中下三層,會發現第一次測量大部分被標記dna都在下層,第二次會集中出現在中層,第三次會出現在上和中,說明上層是不含氮15的,中層還含有氮15,但是不在下層,說明dna複製的方式是半保留複製的,自己理解一下,不會可以追問,望採納
證明dna半保留複製的那個實驗,**等,求懂的人幫幫忙
9樓:鋼牙妹小詹
這個是看出來的,15n的分子質量大在下層,14n在上層,但是如果兩個不同時存在,就不能辨別,因為不知道密度梯度離心的介質中的物質與15n/14n的密度關係,如果知道的話應該是可以的
為什麼證明dna的半保留複製要標記n,而不用p
10樓:demon陌
人的細胞先在含氮
15的培養基和普通培養基上擴增,得到含氮15的dna和不含氮15的氮14dna的兩種細胞,下一步是將含氮15dna的細胞取適量轉移至普通培養基。
經過一代後,用氯化銫密度梯度離心等數量的三種細胞,因為同位素的密度不同,一半氮十五一半氮十四的dna分子會在氮十五和氮十四的dna分子之間出現一個新的區帶,兩代後的細胞離心和一代的比較會發現含有兩種氮的雜合的dna並不會增加。
dna的半保守複製闡述了在所有已知細胞中dna複製的機制。半保留複製的名字**於這樣的事實,在複製產生的兩個子代dna拷貝中,每個拷貝的dna雙鏈包含一個和親代dna單鏈和一個新合成的dna單鏈。
如何證明生物的dna複製方式是半保留複製
11樓:free我是你浩哥
半保留複製:是dna複製的模式
12樓:逛街老鼠人人豬
利用同位素標來記的方法用自含有氮15的nh4cl培養液來培養大腸桿菌,獲得含有氮15標記的大腸桿菌,然後將大腸桿菌轉到含氮14的普通培養液中,並在不同時刻提取大腸桿菌dna進行密度梯度離心,由於氮15比氮14重,會出現分層的現象,人為地將試管分為上中下三層,會發現第一次測量大部分被標記dna都在下層,第二次會集中出現在中層,第三次會出現在上和中,說明上層是不含氮15的,中層還含有氮15,但是不在下層,說明dna複製的方式是半保留複製的,自己理解一下,不會可以追問,望採納。
怎樣用實驗原理來證明dna是半保留複製
在僅以15nh4c1為氮源的培養基裡，使大腸桿菌繁殖數代，將其dna用重同位素15n標記上，然後立即將大腸桿菌轉移到14nh4c1培養基中繼續培養，按不同時間取樣品抽提dna，採用氯化銫密度梯度離心法分析。結果表明dna分子在0代顯示重密度 hh 1代全部為中等密度 hl 2代表現為中等密度 hl ...
哪個實驗證明DNA的半保留複製，哪個實驗證明DNA的半保留複製？真核生物的 要詳細。
在上世紀中葉 1950s james watson 和 francis crick提出了著名的dna雙螺旋以及雙鏈間鹼基配對的模型,根據這個模型,他們進一步提出了dna複製的半保留模型 semiconservative model 雖然這個模型比當時並存的全保留模型 conservative 模型 ...
dna半保留半不連續複製的過程，dna半保留半不連續複製的過程？
dna複製是bai指dna雙鏈在細胞 以前進行du的復zhi制過程，複製的結果是dao一條雙鏈變成兩條一內樣的雙鏈 如果容複製過程正常的話 每條雙鏈都與原來的雙鏈一樣。這個過程是通過名為半保留複製的機制來得以順利完成的。複製可以分為以下幾個階段 起始階段 解旋酶在區域性雙螺旋結構的dna分子為單鏈，...