1樓：匿名使用者
你是做什麼電泳？用的什麼東西？要達到什麼目的？請把問題說清楚加熱是sds-page測量蛋白質複合物分子量的必須步驟。
通過加熱，促進蛋白形成橢圓結構，橢圓的短軸一致，長軸依據蛋白的分子量而不同，在電泳中表現為不同的泳動速率，與蛋白標準對照，從而達到測定分子量的目的。
蛋白質在聚丙烯醯胺凝膠中電泳時，它的遷移取決於它所帶電荷以及分子大小和形狀等因素。如果在聚丙烯醯胺系統中加入陰離子去汙劑十二烷基磺酸鈉 (sds),大多數蛋白質能與sds按一定比例結合，即每克蛋白質結合1.4g的sds－複合物都帶上相同密度的負電荷，它的量大大超過了蛋白質分子原有的電荷量，因而消除了蛋白質原有的電荷差別，使蛋白質分子電泳的遷移率主要取決於本身的分子量，而與蛋白質所帶的電荷無關，在一定條件下，蛋白質的分子量的對數與電泳遷移率間呈負相關。
加熱會使蛋白質變性，肯定會改變複合物的性質，只要不是改變分子量/表觀分子量，就不會影響結果。
2樓：匿名使用者
我做sds-page的時候上樣沒有要加熱
我們的樣品還是冷藏在冰箱裡的暈..
3樓：匿名使用者
樣品與上樣buffer*****
電泳為什麼是要將樣品煮沸5分鐘
4樓：匿名使用者
sds-page電泳你做的是變性電泳,也就是加sds,並需要沸煮的. 在沸煮過程中,蛋白樣品必然變性由原來的球狀變成線性,但是形成的時候蛋白質-sds複合物,所以不會沉澱.這種複合物在凝膠中遷移率只跟蛋白質分子量大小有關,所以能進行蛋白的分離鑑定.
marker一般都是預變性的也就是預煮過的,所以可以不用再煮了.
蛋白電泳煮沸到底是什麼作用
5樓：武漢博歐特生物
煮沸是讓蛋白質變性，正常的sds-page，在sds、還原劑和煮沸的作用下，蛋白質的二級**結構都被破壞，二硫鍵也被開啟，蛋白變為線性，且跟大量sds結合，sds的負電荷遮蔽了蛋白本身帶的電荷，這樣，各種蛋白跑得快慢就只跟分子量大小有關。你的實驗中使用的是非還原上樣buffer，如果目的蛋白中有二硫鍵，就無法開啟，尤其是沒煮過的，可能還保留一定的結構和構象，這樣蛋白的遷移率還受蛋白構象影響，跑得稍快可能是跟煮過的相比，其構象更緊密的原因。至於為什麼沒煮過的更接近真實分子量，那是因為你用的上樣buffer是非還原的，連marker的遷移率也不是隻跟分子量相關了。
要想準確反映分子量，還是要按標準的sds-page操作，使用還原上樣buffer，煮沸樣品。
為什麼sds-page電泳時樣品液再加樣前要在沸水中加熱
6樓：匿名使用者
溴酚藍在膠中的電泳速度較快，相當於一個很小的蛋白分子，標記你的樣品在膠中的電泳距離。
7樓：友冰衷沛凝
使樣品充分變性，伸展，與sds充分結合，成為雪茄狀，這樣分子量才能用marker計算，因為marker都是充分變性的。
電泳前蛋白煮沸 重複實驗時還需要煮嗎
8樓：匿名使用者
重複試驗時不需要煮沸。
蛋白煮沸變性之後是不能再復性的了，所以煮沸一次之後想重複實驗的話不需要煮沸了。
蛋白電泳一般指聚丙烯醯胺凝膠電泳，它有兩種形式：非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳（native-page）及sds-聚丙烯醯胺凝膠（sds-page）；非變性聚丙烯醯胺凝膠，在電泳的過程中，蛋白質能夠保持完整狀態，並依據蛋白質的分子量大小、蛋白質的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開。而sds-page僅根據蛋白質亞基分子量的不同就可以分開蛋白質。
9樓：匿名使用者
電泳前蛋
白煮沸，重複實驗時當然需要煮
電泳前蛋白煮沸是為了能讓蛋白和上樣緩衝液中的sds更好的結合，已消除蛋白本身電荷的影響。重複實驗要跑電泳，當然也需要在電泳前將蛋白煮沸。一般重複實驗就是要重複各個實驗步驟，以免最終結果出現差異
sds-page樣品上樣前為什麼要加熱
10樓：北京索萊寶科技****
蛋白質電泳前,需用樣品緩衝液處理,樣品緩衝液中除sds外,還有還原劑β-巰基乙醇,它可將蛋白質分子中的s-s（二硫鍵）還原.電泳樣品製備時加熱,就是為了加速這些組分與蛋白質的反應.
蛋白質電泳，樣品上樣前為什麼要沸水浴
11樓：匿名使用者
只有煮沸，才copy
能消除蛋白質的bai
立體二級結構，伸展為一維線性du結構zhi，所以一般來講二聚體dao都會解體，才能完全按照分子量跑電泳，加的蛋白marker才有指示分子量的意義！二硫蘇糖醇或巰基乙醇可以破壞二硫鍵，煮加速蛋白質的變性，sds的存在可以使每個氨基酸帶相同的電荷，使整個蛋白呈線性結構。100度煮10min後13000，離心5分鐘，取上清電泳，因為沉澱會導致拖尾。
也可以取上清到另一管，4度可以放一週備再次電泳。
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因為在應用時需要使用直流電，把被電泳的工件放在陰極，另一端要連線回316精鋼製成的鋼板，稱為陽極答板，這樣才能產生電壓，而且陽極板要放在電泳槽裡，外面還要包裹陽極膜，為了防止陽極板與電泳槽相互導電，所以電泳槽體內側要做絕緣處理，陰極和陽極是需要一定比例的，陽極面積要小於陰極面積，所以陽極板肯定不能跟...
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主要可能是temed和ap的量的問抄題，你可以參考一下我的配方 分離膠12.5 sds 10ml體系 分離緩衝 2.5ml 貯膠 4.167ml 純水 3.233ml 10 sds 0.1ml 10 ap 100微升 temed 5微升 濃縮膠5 4ml體系 濃縮緩衝 1ml 貯膠 0.6ml 純水...