可以採用哪些方法將基因轉移到大腸桿菌中

2022-12-08 14:15:54 字數 3656 閱讀 6057

1樓:三子葉聖光之橙

利用基因工程技術可以將外源基因轉入大腸桿菌中。

過程:第一步:用限制性核酸內切酶(簡稱內切酶)切割所需要的外源基因(也稱為目的基因),並提取出來。

第二步:將大腸桿菌裡的質粒提取出來,並用內切酶切割出切割點,隨後將目的基因+dna連線酶連線上去(就像你縫衣服一樣)。

第三步:把質粒匯入大腸桿菌中,並在一段時間過後隨機提取出質粒檢測,看外源基因是否已經開始在大腸桿菌中複製

我記得不是太清楚,詳情請見高中生物選修 ——現代生物基因技術

2樓:直到遇見你天蠍

1)基因是控制性狀(特徵)的基本遺傳單位.生物的性狀是由基因決定的,基因決定性狀的表達,一個基因對應一個性狀.因此青黴能產生青黴素,青黴素這一性狀的產生靠基因控制.(2)把一種生物的某個基因,用生物技術的方法轉入到另一種生物的基因組中,培育出的轉基因生物,就有可能表現出轉入基因所控制的性狀.科學家把控制合成胰島素的基因轉入大腸桿菌內,在條件適宜時,依靠大腸桿菌的快速繁殖產生大量的青黴素.因此以大腸桿菌產生青黴素的技術稱轉基因技術.(3)科學家將青黴中有關基因轉入大腸桿菌中去,故轉基因後大腸桿菌產生青黴素是青黴素基因控制的結果.從而說明了控制生物性狀的是青黴素基因,因此得出的結論是基因控制生物的性狀. 故答案為:(1)基因  (2)轉基因技術  (3)青黴素基因控制;基因控制生物的性狀

將目的基因匯入大腸桿菌和農桿菌等微生物細胞用什麼方法該方法用何種溶液處理?

3樓:敖宛暢

除非你的實驗目的一定要求你要用農桿菌,或者是最後一步要轉基因了,否則,大腸桿菌更好,因為它的商業化各種都很齊全,想要什麼就有什麼。

如何將一個質粒dna轉入到大腸桿菌感受態細胞中

4樓:萘兒帕爾特管一

不對,通過轉化到感受態

細菌中,不是細胞.感受態的大腸桿菌,可以自己製作也可以通過購買回.之後答將細菌凃到含有抗生素的板子上,長出克隆後挑取單克隆,將單克隆加入含有抗生素的細菌培養基中培養,之後提取質粒,提取質粒可以購買相應的試劑盒,按照試劑盒的說明書操作即可.

質粒是帶有抗性基因的,只有含有該質粒的細菌才能在含有對應抗生素的培養基中存活並增殖,這樣就能確保是你的表達載體質粒.當然為了防止雜菌的汙染,整個過程中最好是無菌操作.而表達載體質粒有可能出現突變等情況,所以可以在提出質粒之後,取少量質粒送測序,來確保序列的無誤.

大腸桿菌的轉化原理及方法

5樓:青島白癜風好

大腸桿菌轉化可以:(1)將重組dna分子匯入大腸桿菌受體細胞進行復制,增殖和表達,以獲得目的基因;(2)驗證大腸桿菌感受態細胞效果;(3)用於分子生物學其他研究。

實驗方法原理:質粒dna或重組dna粘附在細菌細胞表面,經過42°c短時間的熱擊處理,促進吸收dna.然後在非選擇培養基中培養一代,待質粒上所帶的抗菌素基因表達,就可以在含抗菌素的培養基中生長。

實驗步驟

一、實驗材料準備

1. 器材

旋渦混合器,微量移液取樣器,移液器吸頭,1.5 ml 微量離心管,雙面微量離心管架,乾式恆溫氣浴(或恆溫水浴鍋),製冰機,恆溫搖床,培養皿(已鋪好固體lb-amp),超淨工作臺,酒精燈,玻璃塗棒,恆溫培養箱。

2. 試劑

培養基(不加抗菌素),lb培養基(加抗菌素),無菌ddh2o,iptg,x-gal。

3. 材料處理

無菌ddh2o,1.5 ml 離心管裝入鋁製飯盒(滅菌)、移液器吸頭裝入相應的吸頭盒(滅菌),20%iptg(m/v),2% x-gal(m/v,用n,n-二甲基甲醯胺配)。

二、操作步驟

1. 事先將恆溫水浴的溫度調到42℃。

2. 從-70℃ 超低溫冰櫃中取出一管(100 μl)感受態菌,立即用手指加溫融化後插入冰上,冰浴5~10 min。

3. 加入5 μl 連線好的質粒混合液(dna含量不超過100 ng),輕輕**後放置冰上20 min。

4. 輕輕搖勻後插入42℃水浴中1~2 min進行熱休克,然後迅速放回冰中,靜置3~5 min。

5. 在超淨工作臺中向上述各管中分別加入500 μl lb培養基(不含抗菌素)輕輕混勻,然後固定到搖床的彈簧架上37℃**1 h。

6. 在超淨工作臺中取上述轉化混合液100-300 μl,分別滴到含合適抗菌素的固體lb平板培養皿中,用酒精燈燒過的玻璃塗布棒塗布均勻。

7. 如果載體和宿主菌適合藍白斑篩選的話,滴完菌液後再在平板上滴加40 μl 2% x-gal,8 μl 20% iptg,用酒精燈燒過的玻璃塗布棒塗布均勻。

8. 在塗好的培養皿上做上標記,先放置在37℃恆溫培養箱中30~60 min 直到表面的液體都滲透到培養基裡後,再倒置過來放入37℃恆溫培養箱過夜。

9. 在被細菌汙染的桌面上噴灑70%乙醇,擦乾桌面,寫實驗報告。

10. 觀察平板上長出的菌落克隆,以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑。

注意事項

1. 玻璃塗布棒上的酒精熄滅後稍等片刻,待其冷卻後再塗。

6樓:正保醫學教育網

所謂的轉化是將外源dna分子引入受體細胞,使之獲得新的遺傳性狀的一種手段,它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領域的基本實驗技術。

在自然條件下,很多質粒都可通過細菌接合作用轉移到新的宿主內,但在人工構建的質粒載體中,一般缺乏此種轉移所必需的mob基因,因此不能自行完成從一個細胞到另一個細胞的接合轉移。如需將質粒載體轉移進受體細菌,需誘導受體細菌產生一種短暫的感受態以攝取外源dna。細胞處於能夠吸收dna的狀態稱感受態,處於感受態的細胞稱作感受態細胞。

轉化過程所用的受體細胞一般是限制修飾系統缺陷的變異株,即不含限制性內切酶和甲基化酶的突變體(rˉ,mˉ),它可以容忍外源dna分子進入體內並穩定地遺傳給後代。受體細胞經過一些特殊方法的處理後,細胞膜的通透性發生了暫時性的改變,成為能允許外源dna分子進入的感受態細胞。進入受體細胞的dna分子通過複製,表達實現遺傳資訊的轉移,使受體細胞出現新的遺傳性狀。

將經過轉化後的細胞在篩選培養基中培養,即可篩選出轉化子(即帶有異源dna分子的受體細胞)。

7樓:禾生七七

其實感受態菌先低溫的作用是讓dna-cacl2複合體粘著在菌體表面,

短暫熱激的作用是讓菌壁通透性改變,再經過2min左右冰上靜置,附著在表面上的dna就進入菌體了。

以上就是大腸桿菌的轉化過程。

大腸桿菌的簡介

人和動物腸道中最常見的一種細菌,主要寄生於大腸內,約佔腸道菌中的1%。是一種兩端鈍圓、能運動、無芽孢的革蘭氏陰性短桿菌。

正常情況下是腸道中的正常菌群,能合成維生素b和k,某些菌株產生的大腸菌素能抑制痢疾桿菌等致病菌的生長。但在機體免疫力下降或細菌侵入腸道外組織器官時,即成為條件致病菌,引起腸道外感染。

致病性大腸桿菌可引起腸道感染。在水和食品中檢出,可認為是被糞便汙染的指標。大腸菌群數常作為飲水、食物或藥物的衛生學標準。

人們將人類的胰島素基因轉移到大腸桿菌體內,是大腸桿菌製造出能**「糖尿病」的胰島素,這種技術叫(

8樓:於覓露

d試題分析:基因工程製備胰島素既使用限制性內切酶從人的dna中提取胰島素基因,再使用細胞工程,從大腸桿菌的細胞質中提取質粒,通過基因重組的方法將取出的目的基因與質粒,形成一個能表達出胰島素的dna質粒,然後將質粒送回大腸桿菌,在大腸桿菌內,質粒通過表達轉錄與翻譯後,便產生出胰島素蛋白質,應用的是轉基因技術,選d。

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