如何在血清中提取,如何在血清中提取DNA

2021-12-19 17:06:17 字數 5264 閱讀 4483

1樓:

血清樣本中的dna含量較少,較難提取,dna提取檢測用qiagen、biog方法一般比較普遍,基本上滿足了腫瘤基因檢測的需要

2樓:匿名使用者

有專門的血清dna提取試劑盒,提取方法簡便,效率高。

3樓:匿名使用者

原理:1. dna在nacl溶液中的溶解度,是隨著nacl的濃度的變化而改變的。

當nacl的物質的量濃度為0.14 mol/l時,dna的溶解度最低。利用這一原理,可以使溶解在nacl溶液中的dna析出。

2.dna不溶於酒精溶液,但是細胞中的某些物質則可以溶於酒精溶液。利用這一原理,可以進一步提取出含雜質較少的dna。

3.dna遇二苯胺(沸水浴)會染成藍色,因此,二苯胺可以作為鑑定dna的試劑。

準備工作:

製備雞血細胞液,方法是:將質量濃度為0.1g/ml的檸檬酸鈉溶液100ml,置於500 ml燒懷中,注入新鮮的雞血(約180 ml),用玻璃棒攪拌,使其充分混合,以免凝血。

靜置於冰箱內一天,使血細胞自行沉澱。(也可以用離心機離心2 min**速1000轉/分)。用吸管吸去上清液。

方法步驟:

1.提取細胞核物質:順時針方向攪拌,稍快,稍重。 5 min

2.溶解dna:

3.析出含dna的黏稠物:蒸餾水300ml,逆時針方向攪拌,緩慢

4.過濾:取黏稠物

5.再溶解:順時針方向攪拌,較慢。3 min

6.過濾:取濾液。

7.提取出含雜質較少的dna,逆時針方向攪拌,稍慢。5 min

8.dna的鑑定:沸水浴5min

要是其他用途你就在看看七他人的回答好了。

血清中提取dna的方法

4樓:匿名使用者

武漢就這幾家公司

給公司打**他們把什麼什麼資料給你查好

然後你選擇定就行了

比如凌飛、生命公司、眾一生物、古態生物等

5樓:匿名使用者

血清中提取dna可看看biog的操作步驟:1.請自行準備:

無水乙醇、15ml離心管。2.取出洗滌液,按以下操作:

a) 洗滌液a:31.5ml加入13.

5ml無水乙醇;63ml加入27ml無水乙醇。b) 洗滌液b:13.

5ml加入31.5ml無水乙醇;27ml加入63ml無水乙醇。c) 配製好的洗滌液如出現沉澱,可在37℃溶解,搖勻後使用。

3.取15ml離心管,加入1500μl樣本,30μldna carrier混合均勻,加入1500μl 裂解液及150μl 消化液,振盪混勻,56℃水浴10 分鐘。4.

加入6000μl無水乙醇,輕輕顛倒混勻,如有半透明懸浮物,不影響dna的提取與後續實驗。5.將吸附柱放入收集管內,將4590μl上述溶液轉入吸附柱內,靜置2 分鐘,5,000 rpm 離心2分鐘,棄收集管內廢液;6.

將吸附柱放**集管內,將剩餘4590μl溶液轉移至吸附柱內,重複步驟5。7.將吸附柱放**集管內,加3750μl 洗滌液a至吸附柱內,5,000 rpm 離心1 分鐘,棄收集管內廢液。

8.將吸附柱放**集管內,加3750μl 洗滌液b至吸附柱內,5,000 rpm 離心1 分鐘,棄收集管內廢液。9.

將吸附柱放**集管內,5,000 rpm 離心2 分鐘,離去殘留的洗滌液。10.取出吸附柱,放入新的15 ml離心管內,加入250-400μl 洗脫液,靜置3 分鐘,5,000 rpm離心3 分鐘,收集dna溶液。

提取的dna即可用於下一步實驗或-20℃儲存。如需濃縮核酸,則可繼續進行後續步驟。11.

於洗脫液中加入800ul無水乙醇,輕輕顛倒混勻,5,000 rpm 離心5分鐘,棄上清。12.開蓋室溫放置5min,待乙醇揮發後,加入30-50ul洗脫液溶解核酸。

提取的dna即可用於下一步實驗或-20℃儲存。

6樓:匿名使用者

吖~~~你專業你都不知道,真悲哀。你dna是不用提取了,提取出來也是做反面教材的~`~~~

如何從血清中提取dna

7樓:相依相伴

先好好看看課本,這是高中生物中很經典的一個實驗,高考時常的也考它,提取dna 使用的是試劑,但這個實驗的重點是曾樣控制每次稀釋過程中稀釋的程度,又是後由於你的稀釋劑過量而不能將絮狀的dna 提取出來!!!

如何從血液中提取遊離dna

8樓:匿名使用者

高中生物裡邊用的方法

原理:1. dna在nacl溶液中的溶解度,是隨著nacl的濃度的變化而改變的。

當nacl的物質的量濃度為0.14 mol/l時,dna的溶解度最低。利用這一原理,可以使溶解在nacl溶液中的dna析出。

2.dna不溶於酒精溶液,但是細胞中的某些物質則可以溶於酒精溶液。利用這一原理,可以進一步提取出含雜質較少的dna。

3.dna遇二苯胺(沸水浴)會染成藍色,因此,二苯胺可以作為鑑定dna的試劑。

準備工作:

製備雞血細胞液,方法是:將質量濃度為0.1g/ml的檸檬酸鈉溶液100ml,置於500 ml燒懷中,注入新鮮的雞血(約180 ml),用玻璃棒攪拌,使其充分混合,以免凝血。

靜置於冰箱內一天,使血細胞自行沉澱。(也可以用離心機離心2 min**速1000轉/分)。用吸管吸去上清液。

方法步驟:

1.提取細胞核物質:順時針方向攪拌,稍快,稍重。 5 min

2.溶解dna:

3.析出含dna的黏稠物:蒸餾水300ml,逆時針方向攪拌,緩慢

4.過濾:取黏稠物

5.再溶解:順時針方向攪拌,較慢。3 min

6.過濾:取濾液。

7.提取出含雜質較少的dna,逆時針方向攪拌,稍慢。5 min

8.dna的鑑定:沸水浴5min

要是其他用途你就在看看七他人的回答好了。

9樓:匿名使用者

遊離dna也叫cell free dna,一般存在於血漿、血清、胸腹水、腦脊液等樣本中,含量較少,較難提取,遊離dna提取檢測用qiagen、biog方法一般比較普遍,基本上滿足了腫瘤基因檢測的需要。

如何從血清中提取dna? 目的是做pcr模板,檢測細菌和病毒。

10樓:匿名使用者

現在最簡便的方法是買全血dna抽提試劑盒,技術已經相當成熟,裡面一般都有使用說明。

國產的就很好用了,而且便宜。

求助:從全血裡面提取dna和血清/血漿提取dna有

11樓:匿名使用者

很多人在做血液**樣本dna提取時會對樣本型別概念不清楚,所以在做核酸提取、核酸檢測類的實驗時,對提取試劑的選擇比較隨意,其實驗結果也往往不盡如人意,那麼不同血液**的樣本有什麼區別,對核酸提取、核酸檢測有什麼影響呢?

一、什麼是外周血,什麼是全血,什麼是血清,什麼是血漿?

新鮮的血液(也叫全血,醫學上稱為外周血)加入抗凝劑(如檸檬酸鈉,edta等,一般醫院採血都是用抗凝管採集),靜置一段時間,會出現分層的現象。上面淡黃色的半透明液體是血漿,約佔55%,下面暗紅色不透明的是紅細胞,約佔45%。中間薄薄的一層白色物質是白細胞和血小板,不到1%。

紅細胞、白細胞、血小板共同組成了血細胞。

簡單來說,全血包括血漿和血細胞(紅細胞、白細胞、血小板),血漿包括血清和纖維蛋白原。

二、血清血漿遊離dna提取需要多少樣本量?得率多少正常?

圖1 qiagen關於cfdna得率的資料圖

圖2 biog血漿dna提取試劑盒做血漿樣本dna提取,q-bit測濃度無讀數,pcr檢測結果靶基因(ct 25左右)以及內參(ct 21左右)擴增曲線

血清、血漿樣本中游離核酸含量較低,根據qiagen公司資料,1ml血漿樣本dna提取得率只有7.35ng左右(圖1)。這麼低的核酸濃度,如果直接用紫外法檢測,得出的數值並不準確,而且多次測量的結果會變異很大。

有些研究者提取血漿核酸後習慣於先用紫外檢測濃度,發現紫外檢測不出來或濃度很低時便認為提取失敗,放棄後面進一步的實驗,其實並不可取。我們可以把紫外讀數作為參考,但是不能作為判斷得率的唯一標準,最好還是要做個pcr或熒光定量。根據qiagen公司的實驗,血清血漿的量與提取的核酸量成正比。

因而,如果要提高核酸得率,可通過增加血清或血漿的量來實現。一般地,做血漿或血清核酸提取,樣本量最好在1ml以上。如果1ml或更大量樣本得不到滿意的檢測結果,則應及時考慮更換提取試劑盒。

目前國內常用的qiagen、biog血漿核酸提取試劑盒核酸提取的得率都很不錯,基本上能夠滿足絕大多數實驗的要求。

三、不同檢測目標的實驗選擇什麼型別的樣本?

從核酸檢測的角度講,人的基因組更多的存在於白細胞中,而只有少量遊離核酸存在於血清、血漿中,如果白細胞大量凋亡,血清血漿中的遊離核酸量會有所增加。如果機體患有惡性腫瘤,腫瘤組織壞死,壞死的腫瘤細胞釋放出核酸片段或腫瘤細胞發生血液轉移,血漿血清中的核酸量也會增加。因而,如果是檢測部分目標基因,如篩查地中海貧血症,篩查色盲基因等,應該以全血作為實驗樣本,因為血清和血漿中所含有的人的核酸數量遠遠少於全血,檢測靈敏度會降低很多。

如果要檢測腫瘤相關基因,則要選擇血漿或血清樣本。如果以病原體核酸為檢驗目標,如檢測乙肝感染情況,檢測感冒病毒,檢測有無敗血症等,則以血清或血漿為實驗樣本,這會天然地剔除血細胞這種雜質,明顯降低核酸提取過程中的難度,有利於提高核酸純度,增加檢測反應靈敏性和穩定性。血清和血漿相比,一方面血清中含有更少的纖維蛋白原,另一方面血清中的dna是迴圈dna,主要**於病變組織,所以使用血清作為實驗樣本,可以更進一步提高樣本純淨度,減少蛋白雜質,提高遊離核酸的濃度,獲得更為靈敏的檢測結果。

12樓:匿名使用者

肯定不行,因為從血液中提取的dna**於白細胞,只有白細胞才有細胞核,所以血液成分中必須有白細胞,血清中不含血細胞,所以不行.

如何從血清中提取rna

13樓:北京索萊寶科技****

血液(全血,也就醫學上說的外周血)中rna的含量很低,1ml一般在3ug左右(1-7ug)。一般是處理抗凝血液。

像以上全血的rna提取有兩種思路:

1)直接處理抗凝的全血,即加入如trizol的裂解液直接往下做。此方法有個缺點:處理的體積血液體積有限,一般1ml trizol處理100ul血液,最多不超過200ul.

2) 先去除血液中的紅細胞分離出其中的白細胞(即淋巴細胞),然後提取白細胞的rna。此方法的缺點:只能提取得到淋巴細胞的rna,血液中游離的如病毒rna無法提得。

14樓:匿名使用者

現在我們做實驗大多不用繁瑣的手提方法了,biog cfdna easy kit可以用於提取血清中的rna

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