用westernblot檢測蛋白有兩個蛋白分子量都是

2021-04-21 10:18:24 字數 1301 閱讀 3516

1樓:武漢博歐特生物

最好來是能分開做,分子量自

一樣的兩個蛋白雖然可以洗掉重新砸抗體,但是據我的經驗一般這種都洗的不是很乾淨,而且只能洗掉二抗,若二抗一樣就不能判斷是哪種蛋白,

分子量相差那麼遠的倆個蛋白,在一張膠上,轉膜會很麻煩,會出現小分子量轉過,大分子量還沒轉到膜上的現象

為什麼western blot結果中,蛋白質檢測分子量會與計算大小不同

2樓:匿名使用者

western blot檢測分子量的結果與理論計算值有差異是非常正常的

事情western blot檢測最重要的意義在於目的蛋白在某細胞或組織中表達情況的定性。而目的蛋白檢測分子量的大小取決於目的蛋白在sds-page的結果,也就是說如果目的蛋白在sds-page上檢測結果是分子量偏大的,那麼在western blot轉膜後也會是偏大的,這和目的蛋白的結構(糖基化修飾),電泳遷移率,緩衝液組成等等都有關係。所以只是一個相對的分子量的結果。

要精確檢測目的蛋白的分子量結果需要做質譜(ms)檢測

如何計算western blot 兩條marker中間蛋白條帶的分子量

3樓:匿名使用者

電泳後會顯示一個條帶,這個散開的條帶可以:

1 在sds-page中監測蛋白回的遷移;答2 確認轉膜效率;

3 根據marker的條帶估計分子量;

4 確定目的蛋白位置.

western 內參用的gapdh 和b-actin蛋白的分子量是多少

4樓:mxx米小夕

western 內參用的gapdh分子量為146kd,檢測條帶大

約在36kd,b-actin分子量為42kd。

嚴謹的western blot實驗設計中要內求有良好的參容照體系,這對實驗結果分析是非常有用。要用western blot比較不同條件下或者不同組織中,目的蛋白表達量的相對多少,前提條件是等量的細胞上樣,才有比較的基礎。特別表達量不高時,上樣量的差別就很可能影響結果的分析。

因此需要內參很重要。

5樓:匿名使用者

常用的蛋白內參抄有 beta actin 和 gapdh,它們是有區別的

gapdh分子量為146kd,檢測條帶大約在36kd,beta actin分子量為42kd。一般選擇內參與要檢測的目的蛋白的分子量最好相差5kd以上

另外,細胞總蛋白的western blot的內參蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的western blot一般用gapdh為內參

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