葉綠體的顯微觀察在分離葉綠體時需要注意什麼問題

2021-03-12 07:25:04 字數 764 閱讀 6767

1樓:姵妜

不同抄色素在有機溶劑裡的不同溶解度.

注意一定要研碎細胞

吸收紙不能全泡在溶劑裡

畫線時要注意輕重和寬度

原理為葉綠體在不同溶液中溶解度不同,或者其離心繫數和其他細胞器不同.注意加入cao等促使研磨充分。‍

2樓:abc智者千里

針對鹽藻:

取培bai養7d 的藻細胞培du養液4500g 離心10min,細胞沉澱重zhi懸dao在新鮮的生長培養

基中充分洗專滌,然後屬4500g 離心10min,除去一些細胞外的粘稠物.將離心得到的細胞沉澱重懸在冰預冷的15ml 分離緩衝液( 1mol/ l sorbitol,50mmol/ l hepes,2mmol/ l edta,1mmol/ l mncl2,1mmol/ lmgcl2,0.5% bsa,0.

1 mol/ l dtt,用koh 調節到ph 7.5) 中.將15ml 重懸細胞液進行冰浴超聲波破碎,超聲波功率200w,共作用64s,每次作用時間8s,間隔時間9.

9s.然後4℃2000g 離心10min,沉澱重懸在3ml 的分離緩衝液中,作為葉綠體粗提液.將葉綠體粗提液加在蔗糖密度梯度( 30%/ 45%/ 59% ,30ml) 上,4℃40000g 離心30min,吸取45%和59% 之間的條帶( 約5ml) ,用3 倍體積的清洗緩衝液( 1 mol/ l sorbitol,25mmol/ l hepes,用koh 調節到ph 7.

5) 清洗收集物,4℃2000g 離心10min,沉澱即為完整的葉綠體.

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