求助,關於小鼠肺組織冰凍切片的製作

2021-03-03 21:30:07 字數 1025 閱讀 4207

1樓:南京金益柏生物科技****

取材前做灌注的話,肺裡的淤血會少些,灌注的越成功,肺裡血越少,再就是取材的時候動作溫柔點,不要弄傷組織。取材後只能多洗,沒有什麼好的辦法。

小鼠腎組織冰凍切片為什麼有自發熒光

2樓:南京金益柏生物科技****

用灌注的方法去掉血管裡的東西。

如果還是有,建議用nabh4 0.5%的pb溶液(ph8左右)浸泡5min,如果沒有了,那多半是殘留醛基造成的自發熒光(綠色更重一些)。注意貼片要牢固。

小鼠腎臟組織冰凍切片做免疫熒光怎麼固定組織

3樓:南京金益柏生物科技****

比較標準一點的可能是切片前後都需要固定,前固定時間較長,後固定時間較短。但有時為了簡便,可能有時只做前固定或者後固定。

請教:肺組織石蠟切片的免疫熒光結果失敗原因

4樓:南京金益柏生物科技****

你這個可能原因有:

1 抗體濃度太大引起非特異著色----解決辦法:降低抗體濃度,可以先在組化上摸一下濃度(主要是一抗)。

2 **時間太長-----解決辦法:縮短**時間,我們一般ms範圍,dapi,200倍下我們是60ms左右(熒光顯微鏡,其他儀器時間不論)

3 蠟引起的背景----解決辦法:徹底脫蠟,每缸時間都要延長。

5樓:匿名使用者

幾點建議,希望有用:

1. dapi濃度降低,或時間縮短,或拍攝時注意調整,太強了。

2. 不知道有沒有摸索抗體的濃度和到底好不好用。取組織(包括陽性對照和肺組織)根據抗體說明書,摸合適濃度,另加上陰性對照(不加一抗)。

不怕麻煩的話還是建議做組化,先不做熒光,當然組化的呈色掌握不好的話,直接熒光也可以,也省得後期再調整濃度。

石蠟切片的自發熒光也是比較重的。但是感覺你的主要問題還在於抗體濃度和孵育時間沒有摸索好,包括dapi的孵育時間,一般3min就足夠了!

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