pET28a怎麼也誘導不出來目的蛋白

2021-03-03 21:27:11 字數 730 閱讀 5055

1樓:匿名使用者

誘導表達沒有目的蛋白產生原因無非兩種一是誘導條件不適合目的蛋白的表內達,可通過改變培養容基,溫度,誘導劑等條件重新摸索出合適的誘導條件。二是目的蛋白的菌種有問題,可通過塗板挑選單克隆菌落重新培養,或者質粒重新轉化表達菌株等方法優化菌種。

載體pet28a構建重組質粒,測序準確,轉至bl21原核表達蛋白,,怎麼也誘導不出來?同批次的bl21別人能誘導

2樓:匿名使用者

1 可能是太弱你看不出來,建議用his抗體做個western 看看是不是有條帶而看不出。

2 是不是融解性太差,建議將你的氨基酸序列做個疏水性分析。如果確實如此的話可能要重新構載體

3樓:美吉生物

換個載體試試,是經常有這種情況的,怎麼表達都表達出來,換個載體就表達出來了,你可以試下

4樓:匿名使用者

有可能是表達量太小,先做個wb驗證下

iptg濃度感覺有點大,我們實驗室最大不超過1mm,一般是0.2mm。

如果可以還是換個載體,感覺28a不怎麼好純化

pet28a做表達載體,蛋白就是不表達,求助

5樓:匿名使用者

蛋白不表達的原因很多,有載體的原因,但肯不定不完全是載體的原因。

可以試試不同的表達菌株,誘導濃度,誘導溫度,誘導時間等等。

崟這個字,在手機上怎麼打不出來。手寫也寫不出。換輸入法也行不通,只能跟別人的複製。可是太麻煩了

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